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南京沃博生物科技有限公司

重組酶聚合酶擴增技術(RPA)應用于腫瘤基因檢測

時間:2020-5-16閱讀:2104

RPA(恒溫擴增)技術應用于腫瘤基因檢測

腫瘤基因相關基因檢測在癌癥早期診斷中意義重大。目前的檢測金標準為PCR和基因測序技術,而這些技術大多需要精密的儀器和復雜的試驗流程,專業的實驗人員配置。在現有的分子診斷技術中,以RPA為代表的核酸等溫擴增技術以其快速,靈敏,無需儀器等特點,使突破以上壁壘成為可能。

 

近日,大連醫科大學劉元斌課題組發明一種無需任何儀器,實現快速檢測突變基因并肉眼識別的新方法,被稱為AS-RPA-PNA-SYBR (ARPS) system。該方法以RPA(重組酶聚合酶恒溫擴增技術)為基礎,加之PNA技術(肽核酸類似物),并利用SYBR Green I核酸染料法顯色,肉眼即可判斷核酸擴增與否。

文章中,作者比較了在PCR,測序以及ARSP在非小細胞肺癌中EGFR突變檢測應用,發現在非小細胞肺癌細胞系中,5分鐘便能檢測到EGFR 19Del(2)缺失突變,10分鐘檢測EGFRL SNP 突變,實現肉眼快速判斷(圖1),并在組織樣本中同樣得到驗證(圖2)。

 

同樣,10到20分鐘之內成功檢測到EGFR點突變。與傳統的DNA測序方法相比較,ARPS有著許多優勢之處,包括時間短,成本低,操作簡單,無需精密儀器等,而且,在基因組DNA樣本中,ARPS可以檢測到30%和40%的靶向突變位點,靈敏度與測序相當(圖3)。之前有文章報道稱,RPA技術與末端熒光檢測和膠體金側流試紙條以及微流控芯片結合檢測EGFR突變,但還沒有類似ARSP肉眼觀測法的應用。

然而,ARSP法同樣有待于進一步優化。比如,對于每一次EGFR檢測來說,檢測靈敏性和特異性都還有待提高;由于樣本量有限,現仍需更多的臨床樣本實驗進行驗證。無論如何,在jing準醫療大背景下,對于一些沒有條件購買測序儀,以及不具備專業操作能力的不發達地區和國家,這種快速簡便,操作簡單的,無需任何儀器的ARSP基因檢測法無疑為癌癥基因檢測提供有效參考,同時也為分子即時診斷領域(POCT)提供新的潛在解決方案。

 

國產化RPA試劑盒正在異軍突起,南京沃博生物科技有限公司作為安普未來生物科技有限公司江蘇省du家代理。安普未來開發的核酸恒溫擴增技術稱為重組酶聚合酶擴增 (MIPA) 技術全系列可替代英國TwistDx Inc公司的RPA試劑盒TwistAmp Basic ,TwistAmp exo ,TwistA m p nfo,TwistAmp exo RT,TwistAmp Basic RT,Milenia Hybridtech 1 側向流試劑條。

運用安普未來開發的核酸恒溫擴增試劑盒RNA恒溫快速擴增試劑盒(熒光型)并利用SYBR Green I核酸染料法顯色,肉眼就可以看出有無擴增。

 

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