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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司
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雙位點(diǎn)HC-kit受體細(xì)胞株；DMF7說(shuō)明書(shū)
2019-8-21 閱讀(150)
| 提 供 商 | 上海邦景實(shí)業(yè)有限公司 | 資料大小 | 4.5KB |
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雙位點(diǎn)HC-kit受體細(xì)胞株；DMF7說(shuō)明書(shū)
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲(chǔ)存。-20℃不可超過(guò)1小時(shí)，以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，也可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
操作步驟 :
1、將長(zhǎng)滿細(xì)胞的培養(yǎng)瓶中原來(lái)的培養(yǎng)液棄去。
2、加入0.5—1ml 0.25%溶液，使瓶底細(xì)胞都浸入溶液中。
3、瓶口塞好橡皮塞，放在倒置鏡下觀察細(xì)胞。隨著時(shí)間的推移，原貼壁的細(xì)胞逐漸趨于圓形，在還未漂起時(shí)將棄去，加入10ml培養(yǎng)液終止消化。 觀察消化也可以用肉眼，當(dāng)見(jiàn)到瓶底發(fā)白并出現(xiàn)細(xì)針孔空隙時(shí)終止消化。一般室溫消化時(shí)間約為1—3分鐘。
4、用吸管將貼壁的細(xì)胞吹打成懸液，分到另外兩到三瓶中，實(shí)踐培養(yǎng)液塞好橡皮塞，置37℃下繼續(xù)培養(yǎng)。第二天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。 附：消化液配制方法： 稱取0.25克蛋白酶（活力為1：250），加入100ml無(wú)Ca2+、Mg2+的Hank’s液溶解，濾器過(guò)濾除菌，4℃保存，用前可在37℃下回溫。
