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上海邦景實業有限公司
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羊駝肺來源細胞細胞傳代培養和注意事項
2018-11-27 閱讀(161)
| 提 供 商 | 上海邦景實業有限公司 | 資料大小 | 14.5KB |
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| 資料類型 | WORD 文檔 | 瀏覽次數 | 161次 |
羊駝肺來源細胞細胞傳代培養
一、原理 細胞在培養瓶長成致密單層后，已基本上飽和，為使細胞能繼續生長，同時也將細胞數量擴大，就必須進行傳代（再培養）。 傳代培養也是一種將細胞種保存下去的方法。同時也是利用培養細胞進行各種實驗的必經過程。懸浮型細胞直接分瓶就可以，而貼壁細胞需經消化后才能分 瓶。
二、材料和試劑 1、細胞：貼壁細胞株 2、試劑：0.25%、1640培養基（含10%小牛血清） 3、儀器和器材：倒置顯微鏡，培養箱、培養瓶、吸管、廢液缸等
三、操作步驟 1、將長滿細胞的培養瓶中原來的培養液棄去。 2、加入0.5—1ml 0.25%溶液，使瓶底細胞都浸入溶液中。 3、瓶口塞好橡皮塞，放在倒置鏡下觀察細胞。隨著時間的推移，原貼壁的細胞逐漸趨于圓形，在還未漂起時將棄去，加入10ml培養液終止消化。 觀察消化也可以用肉眼，當見到瓶底發白并出現細針孔空隙時終止消化。一般室溫消化時間約為1—3分鐘。 4、用吸管將貼壁的細胞吹打成懸液，分到另外兩到三瓶中，實踐培養液塞好橡皮塞，置37℃下繼續培養。第二天觀察貼壁生長情況。 附：消化液配制方法： 稱取0.25克蛋白酶（活力為1：250），加入100ml無Ca2+、Mg2+的Hank’s液溶解，濾器過濾除菌，4℃保存，用前可在37℃下回溫。 溶液中也可加入EDTA，使zui終濃度達0.02%。
羊駝肺來源細胞注意事項：
1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發生請及時和我們。
2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等。
3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落，將細胞置于培養箱內靜置培養過夜，隔天再取出觀察。此時多數細胞均會貼壁，若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍染色測定細胞活力，如果證實細胞活力正常，請將細胞離心后用新鮮培養基再次貼壁培養；如果染色結果顯示細胞無活力，請拍下照片及時和我們，信息確認后我們為您再免費寄送一次。
4. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。培養瓶內多余的培養基可收集備用，細胞傳代時可以一定比例和客戶自備的培養基混合，使細胞逐漸適應培養條件。
5. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和公司技術部溝通交流。
6. 該細胞只能用于科研，不得用于臨床應用。
