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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司
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幼蚊細(xì)胞；C6/36說(shuō)明書(shū)
2019-8-15 閱讀(365)
幼蚊細(xì)胞；C6/36說(shuō)明書(shū)
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冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(shí)(或隔夜)→液氮槽儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲(chǔ)存。-20℃不可超過(guò)1小時(shí)，以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，也可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
幼蚊細(xì)胞；C6/36說(shuō)明書(shū)細(xì)胞傳代培養(yǎng)
一、原理 細(xì)胞在培養(yǎng)瓶長(zhǎng)成致密單層后，已基本上飽和，為使細(xì)胞能繼續(xù)生長(zhǎng)，同時(shí)也將細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)大，就必須進(jìn)行傳代（再培養(yǎng)）。 傳代培養(yǎng)也是一種將細(xì)胞種保存下去的方法。同時(shí)也是利用培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)的必經(jīng)過(guò)程。懸浮型細(xì)胞直接分瓶就可以，而貼壁細(xì)胞需經(jīng)消化后才能分 瓶。
二、材料和試劑 1、細(xì)胞：貼壁細(xì)胞株 2、試劑：0.25%、1640培養(yǎng)基（含10%小牛血清） 3、儀器和器材：倒置顯微鏡，培養(yǎng)箱、培養(yǎng)瓶、吸管、廢液缸等
三、操作步驟 1、將長(zhǎng)滿(mǎn)細(xì)胞的培養(yǎng)瓶中原來(lái)的培養(yǎng)液棄去。
2、加入0.5—1ml 0.25%溶液，使瓶底細(xì)胞都浸入溶液中。
3、瓶口塞好橡皮塞，放在倒置鏡下觀(guān)察細(xì)胞。隨著時(shí)間的推移，原貼壁的細(xì)胞逐漸趨于圓形，在還未漂起時(shí)將棄去，加入10ml培養(yǎng)液終止消化。 觀(guān)察消化也可以用肉眼，當(dāng)見(jiàn)到瓶底發(fā)白并出現(xiàn)細(xì)針孔空隙時(shí)終止消化。一般室溫消化時(shí)間約為1—3分鐘。
4、用吸管將貼壁的細(xì)胞吹打成懸液，分到另外兩到三瓶中，實(shí)踐培養(yǎng)液塞好橡皮塞，置37℃下繼續(xù)培養(yǎng)。第二天觀(guān)察貼壁生長(zhǎng)情況。 附：消化液配制方法： 稱(chēng)取0.25克蛋白酶（活力為1：250），加入100ml無(wú)Ca2+、Mg2+的Hank’s液溶解，濾器過(guò)濾除菌，4℃保存，用前可在37℃下回溫。
