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上海邦景實業(yè)有限公司
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關于人源細胞系如何培養(yǎng)及其他
2019-4-9 閱讀(752)
關于人源細胞系如何培養(yǎng)及其他：
1 貼壁細胞生長緩慢；適當提高血清濃度（不能超過20%），或可根據該細胞生長特性生長密度，考慮消化后，轉移到新的培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng)
2 如果人源細胞系為貼壁細胞，而收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài)，請將懸浮的細胞即時離心，加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天；同時原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基培養(yǎng)3天。3天后若原瓶或者新瓶中的細胞都沒有出現(xiàn)增值而是繼續(xù)脫落死亡，請及時實驗室技術人員會跟進解決
3 生長不均：貼壁細胞若出現(xiàn)分布不均，成島狀生長，可將細胞進行消化，重懸打散細胞，加入新鮮培養(yǎng)基進行培養(yǎng)
人源細胞系常規(guī)培養(yǎng)傳代流程
（1）吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤洗細胞兩次，加2-3ml 0.25%進行消化細胞（注意把握消化時間，通常控制在1-2min）
（2）注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存
（3）取部分細胞懸液轉移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當的*培養(yǎng)基，把細胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)
（4）鏡下觀察消化情況，在HS505.T人淋巴結成纖維樣細胞生長特性邊緣縮小，貼壁松動時（不建議消化到細胞漂浮）去掉，加6-8ml*培養(yǎng)基，輕輕吹打細胞層，盡量把細胞層吹落，吹散。
