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ELISA試驗中主要HRP底物氯萘酚操作步驟

2025-5-27  閱讀(11)

ELISA試驗中主要HRP底物氯萘酚可以形成一種藍黑色產物。敏感性低于DAB,且產物可溶于醇中。它適用于當DAB反應形成較高背景或要求改變產物的顏色。

1.     需要的溶液和特殊設備

0.03%氯萘酚,用無水乙醇溶解(貯存在-20℃),0.05 mol/LTris(pH7.6),過氧化氫,Gelvatol或者Mowiol,光學顯微鏡(通常帶有照相機以便于記錄結果)。

2.     操作步驟

(1) 氯萘酚貯存液的準備:用10 mL無水乙醇溶解0.3 g氯萘酚,貯存于-20℃;

(2) 加100 μL 氯萘酚貯存液至10 mL 0.05 mol/LTris(pH7.6);

(3) 加0.1 mL 3%過氧化氫于水中。過氧化氫一般是以30%的溶液提供,4℃可存放1個月;

(4) 白色沉淀可用濾紙過濾去除;

(5) 加此溶液到標本中,并在室溫孵育10~40 min,水洗終止反應;

(6) 優化:如果需要,進行復染,但只可使用水溶性染料;

(7) 用Gelvatol或者Mowiol封片。




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