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細胞適應無血清培養基方法分享

2025-3-24  閱讀(40)

  目前,血清仍是動物細胞培養中最基本的的添加物,尤其是在原代培養或者細胞生長狀況不良時,常常會先使用有血清的培養液進行培養,待細胞生長旺盛以后,再換成無血清培養液。細胞轉入無血清培養基培養要有一個適應過程,一般要逐步降低血清濃度,從10%減少到5%,3%,1%,直至無血清培養。在降低過程中要注意觀察細胞形態是否發生變化,是否有部分細胞死亡,存活細胞是否還保持原有的功能和生物學特性等。在實驗后這些細胞一般不再繼續保留,很少有細胞能夠長期培養于無血清培養基而不發生改變的。細胞轉入無血清培養之前,要留有種子細胞,種子細胞按常規培養于含血清的培養基中,以保證細胞的特性不發生變化。
 
  為了使細胞適應無血清培養,關鍵的是使所培養細胞:
 
  1.處于對數生長中期
 
  2.>90%活細胞率
 
  3.適應時以較高的起始細胞接種
 
  細胞適應無血清培養基的方法:
 
  1. 直接適應——細胞從添加血清的培養基轉換到無血清培養基(SFM)中。
 
  一些類型細胞可直接從包含血清的培養基適應無血清培養基。對于直接適應,接種細胞密度應該:2.5×105~3.5×105細胞/ml。當細胞密度達到1×106~3×106細胞/ml時,傳代培養細胞。當細胞密度在培養4到7天后達到2×106~4×106細胞/ml時,細胞wan全適應了無血清培養基。每隔3~5天,當細胞密度達到1×106~3×106細胞/ml,細胞活率在90%時,貯備的適應了無血清培養基的細胞培養物應該再次傳代培養。
 
  2. 連續適應——分好幾步把細胞從添加血清的培養基轉換到無血清培養基(SFM)中,與直接適應相比較,連續適應趨向對于細胞更加溫和一些。
 
  (1)、以2倍正常接種密度接種生長活躍的細胞培養物到75%有血清培養基:25%SFM混合培養基中,傳代培養。
 
  (2)、當細胞密度>5×105細胞/ml時,以2×105到3×105細胞/ml細胞密度,在有血清培養基:SFM為50∶50的混合培養基中傳代培養。
 
  (3)、以2×106到3×106細胞/ml細胞密度,25%有血清培養基和75%SFM中傳代培養。
 
  (4)、當細胞密度達到1×106到3×106細胞/ml(接種后4到6天),在100%SFM培養基中傳代培養。
 
  (5)、每隔3到5天,當細胞密度達到1×106到3×106細胞/ml,細胞活率在90%時,貯備的適應了無血清培養基的細胞培養物應該再次傳代培養。
 
  建議備份前一次混合培養的培養物,直到每一次細胞適應了新的混合培養基。每一次減少血清前,可能需要在SFM/有血清混合培養基中進行幾次傳代。
 
  在適應過程中,不要讓細胞生長過度。這將增加選擇亞群的可能性。需要注意,與有血清培養基相比,大部分SFM包含非常少的蛋白質,因而更易于受外界因素的影響。


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