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ELISA試劑盒實驗的原理及選購參考要素

2022-10-17  閱讀(234)

ELISA 即酶聯免疫吸附測定,是一類常用的免疫酶技術。主要方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面,然后利用酶標記(偶聯)的抗體或抗原與之孵育,加入顯色劑顯色,通過酶標儀測定待測物顏色與標準物顏色的差異,繪制出酶活曲線得出待測物濃度。ELISA實驗的原理:

1.包被:抗原或者抗體能以物理性吸附于固相載體表面,原因是蛋白質和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附,吸附之后能保持抗原反應等免疫活性:

2、標記:抗原或者抗體可通過共價鍵與酶連接成酶結合物而此種酶結合物仍能保持其免疫活性和酶的催化特點。

3、顯色:酶結合物與相應包被在固相載體的抗原或抗體結合后,也被固定在固相載體上,加入酶的底物之后可出現顯色反應,根據反應的顏色深淺可計算抗原或者抗體的相對含量。


ELISA試劑盒選購參考要素:
1.特異性:ELISA試劑盒的特異性于試劑盒的關鍵組分,抗體對有關,若抗體對中之一為多抗,另一個必須為單抗,建議使用雙單抗。

2、靈敏度:靈敏度反映的是試劑盒檢出被檢物質的低量的能力,用戶可根據自己樣本中待檢指標的量選擇合適的試劑盒,如果待檢指標量很低,一般的試劑盒不能滿足要求,可選擇高敏的ELISA試劑盒。

3、重復性:科學實驗講求重復性,一般ELISA試劑盒,期板內和板間變異系數應該控制在15%以內。
4、簡便性:試劑盒在保證高質量數據的情況下,實驗時間越短,操作越便利,越容易受到用戶歡迎。





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