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被污染細(xì)胞清除方法及預(yù)防辦法

2022-8-29  閱讀(315)

     培養(yǎng)細(xì)胞一經(jīng)污染,多數(shù)較難處理。在細(xì)胞培養(yǎng)中如果污染細(xì)胞價值不大,宜棄之;在尋找原因后*消毒操作室,復(fù)蘇或重新購置細(xì)胞,再進行細(xì)胞培養(yǎng)。污染細(xì)胞價值較大,又難于重新得到,可采取以下清除細(xì)胞污染方法

1、用MRA處理

用MRA(Mycoplasma Removal Agent)處理細(xì)胞,每4天換一次液,連續(xù)處理15天以確保細(xì)胞純潔健康,效果好。  

 

2、藥物輔助加溫處理

細(xì)胞培養(yǎng)先用藥物處理后,再將污染的組織培養(yǎng)物放在41℃培養(yǎng)18小時,可殺死支原體,但對細(xì)胞有影響。


3、 用清洗純化法清除支原體污染的方法

細(xì)胞營養(yǎng)馴化→細(xì)胞群的篩選→細(xì)胞清洗→反復(fù)離心洗滌。

其原理是利用離心力、細(xì)胞、微生物質(zhì)量和懸液的浮力差達到清除支原體的目的。由于支原體個體小且除發(fā)酵支原體外多為細(xì)胞外寄生,所以通過反復(fù)洗滌細(xì)胞和低速離心換液使其中潛在的支原體數(shù)量降低限。

如結(jié)合敏感抗生素的抑殺作用,可達到更好的效果。

 

4、使用支原體特異性血清  

用5%的兔支原體免疫血清可去除支原體污染,因特異抗體可抑制支原體生長,故經(jīng)抗血清處理后11天即轉(zhuǎn)為陰性,并且5個月后仍為陰性。

但此法比較麻煩,不如用抗生素方便、經(jīng)濟。


預(yù)防污染辦法:

1、孵箱應(yīng)定期用三氧機消毒或者紫外光照射,并用酒精和新潔爾滅試擦孵箱同時孵箱內(nèi)的水應(yīng)是三蒸水;

2、超凈臺\取材\器材\培養(yǎng)液\培養(yǎng)瓶\操作等因素;

3、超凈臺的風(fēng)機不能過大,風(fēng)機到6-8格,否則也可能能致霉菌污染;

4、無菌室經(jīng)甲醛熏蒸消毒后,可用同等量的氨水噴灑中和,約幾小時即可進入操作。





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