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江蘇菲亞生物科技有限公司

植物組織蛋白質(zhì)提取方法

時(shí)間:2016-12-15閱讀:513
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    植物蛋白是蛋白質(zhì)的一種,來源是從植物里提取的,營養(yǎng)與動物蛋白相仿,但是更易于消化。含植物蛋白zui豐富的是大豆。但在飲食中,植物蛋白和動物蛋白要搭配食用。他們的提取方式有兩種,如下:

一、植物組織蛋白質(zhì)提取方法

1、根據(jù)樣品重量(1g樣品加入3.5ml提取液,可根據(jù)材料不同適當(dāng)加入),準(zhǔn)備提取液放在冰上。

2、把樣品放在研缽中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上靜置(3-4小時(shí))。

3、用離心機(jī)離心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃

4、提取上清液,樣品制備完成。

蛋白質(zhì)提取液:300ml1、1Mtris-HCl(PH8) 45ml2、甘油(Glycerol)75ml3、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone)6g。這種方法針對SDS-PAGE,垂直板電泳。

二、植物組織蛋白質(zhì)提取方法( 氯醋酸—丙酮沉淀法)

1、在液氮中研磨葉片

2、加入樣品體積3倍的提取液在-20℃的條件下放置一晚,然后離心(4℃8000rpm以上1小時(shí))棄上清。

3、加入等體積的冰浴丙酮(含0.07%的β-巰基乙醇),搖勻后離心(4℃8000rpm以上1小時(shí)),然后真空干燥沉淀,備用。

4、上樣前加入裂解液,室溫放置30分鐘,使蛋白充分溶于裂解液中,然后離心(15℃8000rpm以上1小時(shí)或更長時(shí)間以沒有沉淀為標(biāo)準(zhǔn)),可臨時(shí)保存在4℃待用。

5、用Brandford法定量蛋白,然后可分裝放入-80℃?zhèn)溆谩K幤罚禾崛∫海汉?0%TCA和0.07%的β-巰基乙醇的丙酮。裂解液:2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml滅菌的去離子水中(終體積為5ml),使用前再加入1M的DTT65ul/ml。這種方法針對雙向電泳,雜質(zhì)少,離子濃度小的特點(diǎn)!當(dāng)然單向電泳也同樣適用,只是電泳的條帶會減少。

 

 

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