AMCA抗小鼠免疫熒光染色試劑盒

商品屬性：

商品介紹：

本試劑盒含有AMCA標記的山羊抗小鼠IgG(H+L)抗體，可以用于檢測小鼠來源的相應一抗，觀察到的顏色為非常鮮艷的藍色。AMCA(7-Amino-4-methylcoumarin-3-acetic acid-NHS ester)是一種常用的非常明亮的藍色熒光探針。AMCA的熒光光譜與DAPI和Hoechst比較接近。AMCA的吸收峰350nm、發射峰450nm。本試劑盒提供了含有熒光標記抗體穩定劑的免疫熒光染色二抗稀釋液，可以確保熒光標記抗體稀釋后在4℃可以保存長達6個月，并且在6個月內至少可以重復使用10次。本試劑盒含有抗熒光淬滅封片液，可以使熒光更加持久。本試劑盒對于六孔板內的細胞樣品或常規切片，至少可以檢測300個樣品。

試劑盒組份：

抗小鼠AMCA———————————60μl

免疫熒光染色二抗稀釋液—————50ml

抗熒光淬滅封片液————————15ml

注意事項：

1. 需熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡。

2. 在使用抗熒光淬滅封片液的情況下可以減緩淬滅，但仍宜盡量避光，特別是需要盡量縮短在熒光顯微鏡下的觀察時間。

3. 熒光物質均易發生淬滅，染色后宜盡快進行熒光顯微鏡下的觀察。如果不能及時觀察可以4℃避光保存，但存放時間通常不宜超過一周，隨著存放時間的延長可能會導致觀察效果越來越差。

4. 免疫熒光染色效果的好壞和一抗的關系非常密切。建議選購有較多文獻報道的并注明可以用于免疫熒光染色的一抗用于本實驗。

5. 如果觀察時發現熒光過弱，可以適當提高一抗的濃度；如果熒光還是比較弱，可以適當提高熒光標記抗體的濃度。

儲存條件：-20℃，有效期一年。

步驟和注意事項：?

準備實驗環境：?確保實驗區域清潔，?使用酒精清潔計數板和蓋玻片，?然后用吸水紙輕輕擦干。?

細胞培養：?

準備試管或培養皿、?細胞培養基和待培養的細胞。?

取出保存于低溫下的細胞苗，?并加入培養基中，?搖晃混合均勻。?

用移液管將細胞培養基和細胞種植在試管或培養皿中。?

將試管或培養皿放置于恒溫培養箱中，?定期更換培養液。?

細胞凍存與復蘇：?

細胞系的凍存是將生長較好的傳代細胞懸浮在加有冷凍保護劑的溶液中，?以一定的冷凍速率降至零下某一溫度，?并在此溫度下對其長期保存的過程。?

復蘇則是將凍存的細胞系恢復到常溫的過程，?原則是“慢凍快融"，?以較大限度地保存細胞活力。?

細胞計數：?

制備細胞懸液，?使用消化單層培養細胞或收集懸浮培養細胞，?制成單個細胞懸液。?

在顯微鏡下，?用10×物鏡觀察計數板四角大方格中的細胞數，?細胞壓中線時，?只計左側和上方者，?不計右側和下方者。?

熒光顯微鏡使用：?

使用熒光染料對細胞進行染色，?并觀察細胞所發出的熒光信號，?以研究細胞結構和功能。?

聚合酶鏈反應（?PCR）?：?

準備PCR反應所需的DNA模板、?引物、?聚合酶和核苷酸。?

按照PCR反應液配制表制備反應液。?

在反應器中加入反應液，?開始PCR反應。?

PCR反應的成功與否，?可以通過電泳、?測序等方法進一步確認。?

轉染：?

準備轉染所需的載體DNA和細胞。?

制備轉染試劑，?將DNA載體溶解于轉染試劑中，?與細胞混合均勻。?

處理轉染細胞，?并進行下一步實驗。?

在操作過程中，?應注意實驗室安全規范，?避免隨意丟棄垃圾，?及時登記購買耗材或試劑，?保持實驗環境的清潔和安全

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