Protein A/G免疫沉淀磁珠試劑盒

商品介紹：

Protein A/G Matrix免疫沉淀磁珠及試劑盒系列產品是利用納米表面技術使Protein A/G高密度定向包被到超順磁性微球表面，與當前國際免疫磁珠市場上同類產品相比，該產品具有更多的抗體結合位點，磁珠使用量更少，非特異性結合率低，可便捷高效地進行免疫沉淀實驗。每毫升免疫沉淀磁珠結合Human IgG的能力可達到300 μg以上，單個沉淀反應僅需25 μL磁珠即可完成檢測。微米級磁珠提供的超大比表面積，大幅縮短抗體與抗原吸附所需的平衡時間，15 min內即可完成抗體吸附過程，30 min內完成抗原沉淀操作。簡短的操作時間避免長時間操作造成目標蛋白水解，保證了目標蛋白的活性及蛋白復合物的完整性。

免疫沉淀磁珠試劑盒配有經過優(yōu)化預制的緩沖液，為免疫沉淀實驗提供了佳的反應條件，增強了免疫沉淀實驗的穩(wěn)定性。

本產品可廣泛應用于細胞裂解物、細胞分泌上清、血清、腹水等樣品中抗原的免疫沉淀反應。操作者可以參考本操作說明書，附表1的數據了解不同種屬來源及亞型的抗體與Protein A磁珠、Protein A/G的結合能力。

儲存條件：2～8℃保存

保存期：1年

注：磁珠結合Human IgG能力(Antibody Capacity)分別為：Protein A：0.4～0.5 mg/mL; Protein A/G：0.5～0.6 mg/mL

商品屬性：

操作流程：

1. 抗原樣品制備：本操作說明書提供以下四種樣品處理方法，建議您根據不同來源的抗原樣品選擇適當的方式進行預處理，使待檢測抗原釋放至樣品溶液中。

血清樣品處理：若目標蛋白豐度較高，建議用結合緩沖液(②)稀釋血清樣品至目標蛋白終濃度為10～100 μg/mL，置于冰上備用(或置于-20℃長期保存)。

懸浮細胞樣品處理：離心收集細胞(4℃，500 g，10 min)，棄上清后稱重，按每毫克細胞50 μL的比例用1× PBS(③)洗滌2次；按每毫克細胞5～10 μL 的比例加入結合緩沖液(②)，同時加入蛋白酶抑制劑(如終濃度為1 mM 的PMSF)，混勻后置于冰上處理10 min；離心收集上清液(4℃,14000 g,10 min)，置于冰上備用(或置于-20℃長期保存)。

貼壁細胞樣品處理：移去培養(yǎng)基，按每1.0×105個細胞150 μL的比例用1×PBS(③)洗滌兩次；用細胞刮棒刮脫細胞，收集至1.5 mL EP管內，按每1.0×105個細胞20～30 μL 的比例加入結合緩沖液(②)，同時加入蛋白酶抑制劑(如終濃度為1 mM的PMSF)，混勻后置于冰上處理10 min；離心收集上清液(4℃，14000 g，10 min)，置于冰上備用(或置于-20℃長期保存)。

大腸桿菌樣品處理：離心收集大腸桿菌(4℃，12000 g，2 min)，棄上清后稱重，按每克(濕重)菌體 10 mL的比例用1×PBS(③)洗滌2次；按每克(濕重)菌體5～10 mL的比例加入結合緩沖液(②)，同時加入蛋白酶抑制劑(如終濃度為1 mM 的PMSF)，重懸菌體，超聲裂解細胞，離心收集上清(4℃，17000 g，10 min)。

2. 磁珠預處理：將免疫沉淀磁珠(①)漩渦振蕩1 min，使磁珠充分振蕩重懸；取25～50 μL磁珠懸液置 于1.5 mL EP管中。加入200 μL 結合緩沖液(②)洗滌，進行磁性分離［將EP管放置于磁性分離器(⑦)上，使磁珠被吸附在管壁至溶液澄清；該操作描述以下省略］，棄上清液，從磁性分離器上取下EP管，重復洗滌一次。后加入200 μL 結合緩沖液(②)重懸磁珠以備用。

步驟和注意事項：?

準備實驗環(huán)境：?確保實驗區(qū)域清潔，?使用酒精清潔計數板和蓋玻片，?然后用吸水紙輕輕擦干。?

細胞培養(yǎng)：?

準備試管或培養(yǎng)皿、?細胞培養(yǎng)基和待培養(yǎng)的細胞。?

取出保存于低溫下的細胞苗，?并加入培養(yǎng)基中，?搖晃混合均勻。?

用移液管將細胞培養(yǎng)基和細胞種植在試管或培養(yǎng)皿中。?

將試管或培養(yǎng)皿放置于恒溫培養(yǎng)箱中，?定期更換培養(yǎng)液。?

細胞凍存與復蘇：?

細胞系的凍存是將生長較好的傳代細胞懸浮在加有冷凍保護劑的溶液中，?以一定的冷凍速率降至零下某一溫度，?并在此溫度下對其長期保存的過程。?

復蘇則是將凍存的細胞系恢復到常溫的過程，?原則是“慢凍快融"，?以較大限度地保存細胞活力。?

細胞計數：?

制備細胞懸液，?使用消化單層培養(yǎng)細胞或收集懸浮培養(yǎng)細胞，?制成單個細胞懸液。?

在顯微鏡下，?用10×物鏡觀察計數板四角大方格中的細胞數，?細胞壓中線時，?只計左側和上方者，?不計右側和下方者。?

熒光顯微鏡使用：?

使用熒光染料對細胞進行染色，?并觀察細胞所發(fā)出的熒光信號，?以研究細胞結構和功能。?

聚合酶鏈反應（?PCR）?：?

準備PCR反應所需的DNA模板、?引物、?聚合酶和核苷酸。?

按照PCR反應液配制表制備反應液。?

在反應器中加入反應液，?開始PCR反應。?

PCR反應的成功與否，?可以通過電泳、?測序等方法進一步確認。?

轉染：?

準備轉染所需的載體DNA和細胞。?

制備轉染試劑，?將DNA載體溶解于轉染試劑中，?與細胞混合均勻。?

處理轉染細胞，?并進行下一步實驗。?

在操作過程中，?應注意實驗室安全規(guī)范，?避免隨意丟棄垃圾，?及時登記購買耗材或試劑，?保持實驗環(huán)境的清潔和安全

下列是公司正在出售的產品：