Tis-EDTA抗原修復液(50×)免疫檢測

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免疫染色實驗，細胞或組織往往需要經多醛、甲醛或其他醛類固定來維持本身的形態結構，然而此步操作通常會封閉抗原決定簇，使得相當多的抗原不能與抗體很好的進行反應，從而引起染色信號衰減，甚至出現假陰性現象。引起抗原決定簇被掩蓋的原因在于：1）醛類固定劑導致組織上的許多氨基酸殘基在分子內或分子間形成醛鍵，從而封閉抗原表位；2）醛類固定劑在固定過程中與蛋白質發生交聯（cross-link），形成醛交聯蛋白，導致抗原表位被封閉。因此，需要對固定組織進行抗原修復（antigen retrieval，AR）來逆轉被掩蓋的抗原表位，使其重新暴露出來，恢復抗原表位-抗體的結合能力，從而改善染色效果。

抗原修復的方法非常多，主要有熱誘導的抗原修復（Heat Induced Epitope Retrieval，HIER）和酶誘導的抗原修復（Proteolytic Induced Epitope Retrieval），修復方法的選擇需要考慮到抗原表達程度、抗體要求、組織類型以及組織固定方法等因素。作為免疫染色至關重要的一步，抗原修復方法的選擇、溫度、pH值、修復時間、修復介質都會影響到實驗結果。實驗者需根據自身的實驗體系以及實驗條件來選擇恰當的修復溶液，從而達到佳的修復效果。

本品為Tris-EDTA抗原修復液，pH 9.0，適合用于經甲醛固定的石蠟切片的抗原修復。本品為50×的濃縮液，使用前需用ddH2O稀釋成1×工作液。

儲存條件：常溫。

步驟和注意事項：?

準備實驗環境：?確保實驗區域清潔，?使用酒精清潔計數板和蓋玻片，?然后用吸水紙輕輕擦干。?

細胞培養：?

準備試管或培養皿、?細胞培養基和待培養的細胞。?

取出保存于低溫下的細胞苗，?并加入培養基中，?搖晃混合均勻。?

用移液管將細胞培養基和細胞種植在試管或培養皿中。?

將試管或培養皿放置于恒溫培養箱中，?定期更換培養液。?

細胞凍存與復蘇：?

細胞系的凍存是將生長較好的傳代細胞懸浮在加有冷凍保護劑的溶液中，?以一定的冷凍速率降至零下某一溫度，?并在此溫度下對其長期保存的過程。?

復蘇則是將凍存的細胞系恢復到常溫的過程，?原則是“慢凍快融"，?以較大限度地保存細胞活力。?

細胞計數：?

制備細胞懸液，?使用消化單層培養細胞或收集懸浮培養細胞，?制成單個細胞懸液。?

在顯微鏡下，?用10×物鏡觀察計數板四角大方格中的細胞數，?細胞壓中線時，?只計左側和上方者，?不計右側和下方者。?

熒光顯微鏡使用：?

使用熒光染料對細胞進行染色，?并觀察細胞所發出的熒光信號，?以研究細胞結構和功能。?

聚合酶鏈反應（?PCR）?：?

準備PCR反應所需的DNA模板、?引物、?聚合酶和核苷酸。?

按照PCR反應液配制表制備反應液。?

在反應器中加入反應液，?開始PCR反應。?

PCR反應的成功與否，?可以通過電泳、?測序等方法進一步確認。?

轉染：?

準備轉染所需的載體DNA和細胞。?

制備轉染試劑，?將DNA載體溶解于轉染試劑中，?與細胞混合均勻。?

處理轉染細胞，?并進行下一步實驗。?

在操作過程中，?應注意實驗室安全規范，?避免隨意丟棄垃圾，?及時登記購買耗材或試劑，?保持實驗環境的清潔和安全

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