γ-谷氨酰轉肽酶(γ-GT)測試盒(微量法)

商品屬性：

商品介紹：

γ-GT廣泛存在與動物、植物和微生物中。其中，哺乳動物腎、胰、肝、腸和腦組織中活性較高。在膽汁淤積、炎癥等刺激下，肝臟合成γ-GT增加，其活性改變對于肝膽系統(tǒng)疾病的診斷具有一定的價值。進行尿、血γ-GT檢測，有利于腎病與尿路感染的鑒別，也有利于腎病與肝膽胰等其它疾病的鑒別。特定的條件下，γ-GT會大量釋放到血液中，這一性質在臨床可用來檢測組織細胞是否發(fā)生了病變，同時還可以作為細胞分化、細胞老化的有效檢測指標。

測定原理：

γ-GT催化谷氨酰對硝基苯胺中γ-谷氨?；D移給N-甘氨酰甘氨，生成對硝基苯胺；通過檢測對硝基苯胺數量，即可計算γ-GT酶活性。

實驗中所需儀器及設備：

可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調節(jié)移液器、1ml比色皿、雙蒸水

步驟和注意事項：?

準備實驗環(huán)境：?確保實驗區(qū)域清潔，?使用酒精清潔計數板和蓋玻片，?然后用吸水紙輕輕擦干。?

細胞培養(yǎng)：?

準備試管或培養(yǎng)皿、?細胞培養(yǎng)基和待培養(yǎng)的細胞。?

取出保存于低溫下的細胞苗，?并加入培養(yǎng)基中，?搖晃混合均勻。?

用移液管將細胞培養(yǎng)基和細胞種植在試管或培養(yǎng)皿中。?

將試管或培養(yǎng)皿放置于恒溫培養(yǎng)箱中，?定期更換培養(yǎng)液。?

細胞凍存與復蘇：?

細胞系的凍存是將生長較好的傳代細胞懸浮在加有冷凍保護劑的溶液中，?以一定的冷凍速率降至零下某一溫度，?并在此溫度下對其長期保存的過程。?

復蘇則是將凍存的細胞系恢復到常溫的過程，?原則是“慢凍快融"，?以較大限度地保存細胞活力。?

細胞計數：?

制備細胞懸液，?使用消化單層培養(yǎng)細胞或收集懸浮培養(yǎng)細胞，?制成單個細胞懸液。?

在顯微鏡下，?用10×物鏡觀察計數板四角大方格中的細胞數，?細胞壓中線時，?只計左側和上方者，?不計右側和下方者。?

熒光顯微鏡使用：?

使用熒光染料對細胞進行染色，?并觀察細胞所發(fā)出的熒光信號，?以研究細胞結構和功能。?

聚合酶鏈反應（?PCR）?：?

準備PCR反應所需的DNA模板、?引物、?聚合酶和核苷酸。?

按照PCR反應液配制表制備反應液。?

在反應器中加入反應液，?開始PCR反應。?

PCR反應的成功與否，?可以通過電泳、?測序等方法進一步確認。?

轉染：?

準備轉染所需的載體DNA和細胞。?

制備轉染試劑，?將DNA載體溶解于轉染試劑中，?與細胞混合均勻。?

處理轉染細胞，?并進行下一步實驗。?

在操作過程中，?應注意實驗室安全規(guī)范，?避免隨意丟棄垃圾，?及時登記購買耗材或試劑，?保持實驗環(huán)境的清潔和安全

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