前列腺酸性磷酸酶測定試劑盒(比色法)

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商品介紹：

前列腺ACP（PACP）增高見于前列腺癌，前列腺梗塞、前列腺手術創傷。機體中有4種形式的ACP，來源于紅細胞、溶酶體、碎骨細胞核及前列腺。淋巴細胞、血小板所含的ACP與溶酶體型相似；粒細胞、胰腺所含ACP與前列腺ACP型相似；高雪氏細胞、多毛白血病細胞、巨細胞骨瘤細胞所含ACP與破骨細胞ACP型相似.血液中ACP的來源為前列腺、脾、肝、胃、腎、紅細胞、白細胞、血小板,但前列腺ACP含量高于其他組織數百倍.所以一般血清總ACP增高與PACP增高是一致的,但為排除其他原因引起的增高,在總ACP增高時測PACP是必要的。

酸性磷酸酶ACP催化α-萘酚磷酸鹽水解，產生α-萘酚和無機磷酸鹽；α-萘酚與重氮鹽反應生成有色偶氮化合物，在530nm處比色測定，通過計算可測出酶的活力。ACP分成可被酒石酸抑制的ACP及不被酒石酸抑制的ACP（非PACP），同一份樣本若用含酒石酸與不含酒石酸的兩種底物測定，二者測定值之差代表前列腺ACP（PACP）的活力。

優點如下：

1、快速簡便：全程約40分鐘，可測48例左右樣本。

2、取樣量微：本法取樣量約100l

3、穩定性好：試劑盒2～8℃存放3個月有效。

4、再現性好：變異系數CV=1.7%。

5、回收試驗： X =97%。

6、受外界影響因素小：干擾因素少，重復性強。

7、測試面廣：可測動物血液、組織等，效果均佳。

步驟和注意事項：?

準備實驗環境：?確保實驗區域清潔，?使用酒精清潔計數板和蓋玻片，?然后用吸水紙輕輕擦干。?

細胞培養：?

準備試管或培養皿、?細胞培養基和待培養的細胞。?

取出保存于低溫下的細胞苗，?并加入培養基中，?搖晃混合均勻。?

用移液管將細胞培養基和細胞種植在試管或培養皿中。?

將試管或培養皿放置于恒溫培養箱中，?定期更換培養液。?

細胞凍存與復蘇：?

細胞系的凍存是將生長較好的傳代細胞懸浮在加有冷凍保護劑的溶液中，?以一定的冷凍速率降至零下某一溫度，?并在此溫度下對其長期保存的過程。?

復蘇則是將凍存的細胞系恢復到常溫的過程，?原則是“慢凍快融"，?以較大限度地保存細胞活力。?

細胞計數：?

制備細胞懸液，?使用消化單層培養細胞或收集懸浮培養細胞，?制成單個細胞懸液。?

在顯微鏡下，?用10×物鏡觀察計數板四角大方格中的細胞數，?細胞壓中線時，?只計左側和上方者，?不計右側和下方者。?

熒光顯微鏡使用：?

使用熒光染料對細胞進行染色，?并觀察細胞所發出的熒光信號，?以研究細胞結構和功能。?

聚合酶鏈反應（?PCR）?：?

準備PCR反應所需的DNA模板、?引物、?聚合酶和核苷酸。?

按照PCR反應液配制表制備反應液。?

在反應器中加入反應液，?開始PCR反應。?

PCR反應的成功與否，?可以通過電泳、?測序等方法進一步確認。?

轉染：?

準備轉染所需的載體DNA和細胞。?

制備轉染試劑，?將DNA載體溶解于轉染試劑中，?與細胞混合均勻。?

處理轉染細胞，?并進行下一步實驗。?

在操作過程中，?應注意實驗室安全規范，?避免隨意丟棄垃圾，?及時登記購買耗材或試劑，?保持實驗環境的清潔和安全

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