(一)試驗原理
細胞被制成分散的懸液后,接種到底物上,能貼壁生長,形成集落。成集落的細胞培養實驗是檢驗培養細胞增殖情況的可靠指標之一,一般認為該方法比生長曲線、分裂指數測定方法的準確性高。
(二)材料
1.待檢材料(藥物)。
2.細胞培養成層的貼壁細胞(如HeLa細胞等)。
3.試劑1640培養基(含10%小牛血清)、o.25%*、甲醇、吉姆薩染液。
4.器材CO2培養箱、解剖鏡、塑料培養皿(3.5 cm)、*。
(三)實驗方法
1.將細胞消化成單個細胞懸液,將細胞懸液分瓶培養,分成不加藥的對照組和加入不同劑量藥物的實驗組。
2.根據細胞種類和實驗需要,于每個培養皿分別接種100、200或500個細胞。
3.將培養皿置CO2孵箱中,2~3周后取出檢查,可見形成集落。用甲醇固定,再用吉坶薩染液染色。
4.用解剖鏡計數每個培養皿中的集落數(以50個細胞以上者為一個集落)。
5.計算5個培養皿的集落數均值,再按以下公式計算集落形成百分率。
(四)結果與分析
用對照組和實驗組的集落形成百分率作圖或繪制成曲線,并進行比較。
(五)注意事項
1.每個培養皿接種的細胞數不宜過多,一般不應超過500個,否則影響計數集落數。
2.為更方便而準確地計數集落數,可先用記號筆將培養皿劃分成4個區域,并將集落用筆點出,然后進行計數。