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上海莼試生物技術(shù)有限公司
初級(jí)會(huì)員 | 第2年

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細(xì)胞培養(yǎng)用液的分裝方法

時(shí)間:2015/12/25閱讀:486
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1)實(shí)驗(yàn)器材的使用方法

    為防止消毒物品的再污染,實(shí)驗(yàn)器材必須無(wú)菌操作:細(xì)胞用液瓶的打開(kāi)、吸液、關(guān)閉等一切操作都要在超凈臺(tái)安全區(qū)進(jìn)行。

(1)鹽水瓶瓶塞的使用

    上塞:瓶口消毒,右手拇指、食指塞進(jìn)膠皮內(nèi),將塞旋入消毒瓶口內(nèi)。瓶口再消毒,瓶直立火焰前方。雙手拇指、中指固定瓶位,雙手食指將膠皮外翻=zui后用消毒紙包裝。

    去塞:瓶口消毒后,用消毒鑷挑開(kāi)膠皮。瓶口再消毒,膠塞旋松取出,瓶順風(fēng)斜放45℃支架。

(2)*瓶瓶塞的使用

    用消毒的臺(tái)鑷取放瓶塞,注意瓶口火焰消毒。貯液瓶塞蓋好,封口膜或膠布密封。

(3)吸管的使用

    取管:右手松夾筒蓋,左手水平抖動(dòng)管筒,管頭端暴露時(shí)取管,筒口消毒套蓋。吸管套吸頭后,火焰上方來(lái)回3次待用。

    注意:粗口徑吸管套前,吸頭先用濕酒精棉球沾濕;飯盒存放的吸管,使用時(shí)將盒蓋開(kāi)一角,用火焰消毒的臺(tái)鑷將遮布掀起一角,吸管頭端暴露,臺(tái)鑷再火焰消毒,將吸管取出,遮布復(fù)原,盒蓋好。

(4)注射器的使用

    安裝:針?biāo)ā⑨樛蚕竞笤诎踩珔^(qū)套好。臺(tái)鑷消毒將針頭固定,字面在上。針頭放人消毒管內(nèi)待用。

    使用:瓶口消毒去塞,直立火焰前方,針頭插入液面下,左手拿針筒,右手提針?biāo)ǎ徛鲆后w。排氣和多余液體推入酒精棉球內(nèi)。

(5)瓶管、蓋的使用

    蓋的使用要求同塞。需使用同一蓋時(shí),蓋使用面放在酒精棉球上。套蓋前,蓋使用面火焰消毒。

2)無(wú)菌濾液分裝

①使用正壓濾器時(shí),采用邊過(guò)濾邊分裝的方法。瓶口的液滴先用微濕酒精棉球吸液,再用干酒精棉球由里向外擦拭,zui后,火焰消毒,加塞包裝。

②使用負(fù)壓濾器時(shí),借助消毒吸管,將液體移入分裝瓶?jī)?nèi),瓶口液滴擦拭方法同①。

③血清、酶液少量無(wú)菌液體用吸管分裝,分裝時(shí)注意多換吸管。

3)細(xì)胞用液的分裝要求

①根據(jù)配量準(zhǔn)備分裝瓶和塞。分裝瓶規(guī)格、數(shù)量應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要準(zhǔn)備,這與每次、每周實(shí)驗(yàn)用量、試劑穩(wěn)定性等有關(guān)。避免包裝瓶過(guò)大、貯液時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或細(xì)胞用液反復(fù)凍融使用,造成營(yíng)養(yǎng)成分損失和微生物污染。按一周用量挑選小包裝瓶。融化后的液體置4℃保存。

②實(shí)驗(yàn)前,做好無(wú)菌室、超凈臺(tái)的清潔、消毒工作。實(shí)驗(yàn)用品清點(diǎn)人臺(tái),超凈臺(tái)啟動(dòng),紫外線消毒40 min。實(shí)驗(yàn)試劑恢復(fù)室溫后,瓶口、瓶外壁酒精消毒入臺(tái)。臺(tái)面酒精消毒,點(diǎn)火,臺(tái)鑷消毒入酒精瓶。這樣做好了實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備。

③分裝前,做好各瓶貯液量標(biāo)記,瓶液量要小于瓶容積的2/3。牛血清等融化后搖勻。方法是:左手掌心托瓶,右手拿瓶口順時(shí)針?lè)较蜉p輕轉(zhuǎn)動(dòng)液體,避免用力過(guò)猛而使液體沾染瓶口和塞。

④抽濾分裝時(shí),盡量減少無(wú)菌室開(kāi)門次數(shù)和非操作人員進(jìn)入。嚴(yán)格無(wú)菌操作,盡量縮短試劑在空氣中暴露的時(shí)間。

⑤比較各分裝瓶液體的顏色:將液體顏色過(guò)淺的瓶棄去,此現(xiàn)象與瓶泡酸后沖洗不凈有關(guān)(瓶?jī)?nèi)殘留酸性物質(zhì))。分裝多瓶時(shí),zui后幾瓶可能出現(xiàn)顏色加深的現(xiàn)象,這是因?yàn)槠靠诔ㄩ_(kāi)時(shí)間過(guò)長(zhǎng),液體CO2逃逸,pH值上升的緣故。顏色過(guò)深的液體用醋酸調(diào)節(jié)后使用。

⑥各試劑瓶標(biāo)記名稱、濃度、配制日期、組號(hào)。細(xì)胞

⑦抽樣(開(kāi)始、中間、zui后瓶)做無(wú)菌試驗(yàn),37℃培養(yǎng)3 d。

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