某些染料如臺盼藍(lán)可使死細(xì)胞染上藍(lán)色，而活細(xì)胞拒染。腫瘤細(xì)胞經(jīng)不同抗癌藥物作用后，用臺盼藍(lán)染色，于光學(xué)顯微鏡下計(jì)數(shù)藍(lán)染細(xì)胞，即可求出不同藥物的細(xì)胞毒作用。

1．材料

(1)待檢藥物：視情況選擇lO種左右。按已知臨床藥物血漿峰值濃度(PPC)，用生理鹽水配成3個稀釋度(O．1 PPC、1 PPC、lO PPC)。

(2)細(xì)胞：手術(shù)切除或*取新鮮腫瘤組織制成單細(xì)胞懸液。

(3)試劑：1％臺盼藍(lán)染液、RPMI 1640培養(yǎng)液(含15％CS、l％HEPES、*100U／ml和*100μg／ml)、1％*或膠原酶、Hanks液。

(4)器材：24孔培養(yǎng)板、顯微鏡、載玻片、蓋玻片、計(jì)數(shù)器。

2．方法

(1)取新鮮腫瘤組織，置含雙抗的RPMI 1640培養(yǎng)液中送檢(4℃，3～4h)。迅速移又含5％CS的Hanks液中洗滌2次，去除其表面的凝血塊及壞死組織等。然后移至無菌平皿內(nèi)，用眼科剪將腫瘤*成肉泥狀，加入RPMI 1640*培養(yǎng)液，經(jīng)200目不銹鋼罔疊磨過濾，收集單個細(xì)胞懸液(如腫瘤組織較硬，則需用*或膠原酶消化后，再用全培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸液)。

(2)取少許細(xì)胞懸液經(jīng)臺盼藍(lán)染色鏡檢，證實(shí)細(xì)胞活性在95％以上，調(diào)整細(xì)胞濃度為l×lO5／ml備用。于24孔培養(yǎng)板內(nèi)滴加0．9ml／孔的細(xì)胞懸液，再于孔內(nèi)滴加不同濃度的各種抗癌藥物(O．1ml／孔)，每個濃度設(shè)3個孔，同時(shí)設(shè)對照孔(加生理鹽水O．1ml／孔)，輕輕搖勻，置37℃、5％CO2孵箱中培養(yǎng)24～zt8h。

(3)每孔加1％臺盼藍(lán)2滴，充分吹吸混勻，滴于載玻片上加蓋玻片后立即于高倍鏡下計(jì)數(shù)100～200個腫瘤細(xì)胞中死亡(即藍(lán)染)的細(xì)胞數(shù)。按下列公式計(jì)算細(xì)胞毒。以細(xì)胞毒大于或等于70％為敏感，大于或等于50％為有效。