實驗步驟

一、酵母菌糖發(fā)酵試驗

1)   糖發(fā)酵基礎(chǔ)液配制好后，按培養(yǎng)液容量的1%加入糖，分裝于杜氏發(fā)酵管中（培養(yǎng)液的高度約為4-5厘米），再在試管內(nèi)加入倒置的小玻管（約0.4×2.0－2.5厘米）一支。每種糖設(shè)三個重復管，<121℃>高壓滅菌15分鐘。細胞
2)   將酵母分別接入上述各發(fā)酵管中，置<30℃>下培養(yǎng)48-72小時，另以不接種者作對照
3)   如產(chǎn)酸則培養(yǎng)液pH值下降而變黃色；如產(chǎn)氣，則必先產(chǎn)酸，并在杜氏小管頂端出現(xiàn)氣泡。
4)   結(jié)果記錄。以“ "表示產(chǎn)酸，“<0">表示產(chǎn)氣，“＋"表示產(chǎn)酸產(chǎn)氣，“－"表示無變化，“堿"表示產(chǎn)堿。 

二、酵母菌碳源同化試驗
生長圖譜法
1)   無碳培養(yǎng)基內(nèi)加入2%的水洗瓊脂，融化后冷卻至45<-50℃>，到至平板。
2)   接種新鮮培養(yǎng)的啤酒酵母于1毫升無菌生理鹽水內(nèi)，攪勻后倒入上述未凝平板內(nèi)，搖勻待凝。
3)   皿底用特種蠟筆寫上被測試各種碳源的標記。
4)   用不銹鋼匙，按標記加入相應的米粒大小的碳源，并以葡萄糖作對照。
5)   <28℃>下培養(yǎng)24-48小時后觀察結(jié)果。

三、酵母菌氮源同化試驗  

1、液體試管法

方法同二，以被測試的氮源代替碳源，不加任何氮源作空白對照。

2、生長圖譜法

方法同二，以被測試的氮源代替碳源，不加任何氮化物作空白對照。

3、結(jié)果觀察

1）液體試管中溶液pH值的變化。

2）生長圖譜中測量形成菌落的大小，說明對各種氮源的利用情況。

四、酵母菌生長曲線的測定試驗 

1、將培養(yǎng)24小時左右的酵母斜面菌種，用無菌水洗下菌苔，以3000轉(zhuǎn)/分的速率離心，得菌體。將酵母菌體沉淀物再用無菌水洗2-3次后，制備酵母菌懸液（細胞數(shù)量約106左右/毫升），測數(shù)備用。

2、取上述菌懸液1毫升于盛有清亮的酵母增殖培養(yǎng)液的試管中，<25℃>下培養(yǎng)，以此為起始時間，記錄起始溶液的細胞數(shù)。并在培養(yǎng)1，2，4，6，8，9，10，11，12，14，16，20，22，24小時時分別取樣檢測酵母菌細胞數(shù)量。

3、酵母菌細胞數(shù)量的檢測

    方法①：活菌計數(shù)法。此法是將以上定時取出的被檢樣品作一系列稀釋后，取一定量體積（在0.1-1毫升之間）的稀釋液涂布于盛有固體培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿內(nèi)，在<25℃>下培養(yǎng)24小時左右，計算培養(yǎng)皿內(nèi)菌落數(shù)就可測出溶液中活菌數(shù)量。

    方法②：血球計數(shù)板計數(shù)法。此法是先將以上定時取出的被檢樣品作一系列稀釋后，使菌落數(shù)約為105-106個/毫升，取一滴稀釋液滴于血球計數(shù)板內(nèi)，在顯微鏡下直接計算細胞總數(shù)。

4、繪制生長曲線

    以酵母菌細胞數(shù)的對數(shù)作為縱坐標，以培養(yǎng)時間作為橫坐標，畫出酵母菌的生長曲線。并分析酵母菌群體的生長規(guī)律。