實驗步驟
一、酵母菌糖發(fā)酵試驗
1) 糖發(fā)酵基礎(chǔ)液配制好后,按培養(yǎng)液容量的1%加入糖,分裝于杜氏發(fā)酵管中(培養(yǎng)液的高度約為4-5厘米),再在試管內(nèi)加入倒置的小玻管(約0.4×2.0-2.5厘米)一支。每種糖設(shè)三個重復管,<121℃>高壓滅菌15分鐘。細胞
2) 將酵母分別接入上述各發(fā)酵管中,置<30℃>下培養(yǎng)48-72小時,另以不接種者作對照
3) 如產(chǎn)酸則培養(yǎng)液pH值下降而變黃色;如產(chǎn)氣,則必先產(chǎn)酸,并在杜氏小管頂端出現(xiàn)氣泡。
4) 結(jié)果記錄。以“ "表示產(chǎn)酸,“<0">表示產(chǎn)氣,“+"表示產(chǎn)酸產(chǎn)氣,“-"表示無變化,“堿"表示產(chǎn)堿。
二、酵母菌碳源同化試驗
生長圖譜法
1) 無碳培養(yǎng)基內(nèi)加入2%的水洗瓊脂,融化后冷卻至45<-50℃>,到至平板。
2) 接種新鮮培養(yǎng)的啤酒酵母于1毫升無菌生理鹽水內(nèi),攪勻后倒入上述未凝平板內(nèi),搖勻待凝。
3) 皿底用特種蠟筆寫上被測試各種碳源的標記。
4) 用不銹鋼匙,按標記加入相應的米粒大小的碳源,并以葡萄糖作對照。
5) <28℃>下培養(yǎng)24-48小時后觀察結(jié)果。
三、酵母菌氮源同化試驗
1、液體試管法
方法同二,以被測試的氮源代替碳源,不加任何氮源作空白對照。
2、生長圖譜法
方法同二,以被測試的氮源代替碳源,不加任何氮化物作空白對照。
3、結(jié)果觀察
1)液體試管中溶液pH值的變化。
2)生長圖譜中測量形成菌落的大小,說明對各種氮源的利用情況。
四、酵母菌生長曲線的測定試驗
1、將培養(yǎng)24小時左右的酵母斜面菌種,用無菌水洗下菌苔,以3000轉(zhuǎn)/分的速率離心,得菌體。將酵母菌體沉淀物再用無菌水洗2-3次后,制備酵母菌懸液(細胞數(shù)量約106左右/毫升),測數(shù)備用。
2、取上述菌懸液1毫升于盛有清亮的酵母增殖培養(yǎng)液的試管中,<25℃>下培養(yǎng),以此為起始時間,記錄起始溶液的細胞數(shù)。并在培養(yǎng)1,2,4,6,8,9,10,11,12,14,16,20,22,24小時時分別取樣檢測酵母菌細胞數(shù)量。
3、酵母菌細胞數(shù)量的檢測
方法①:活菌計數(shù)法。此法是將以上定時取出的被檢樣品作一系列稀釋后,取一定量體積(在0.1-1毫升之間)的稀釋液涂布于盛有固體培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿內(nèi),在<25℃>下培養(yǎng)24小時左右,計算培養(yǎng)皿內(nèi)菌落數(shù)就可測出溶液中活菌數(shù)量。
方法②:血球計數(shù)板計數(shù)法。此法是先將以上定時取出的被檢樣品作一系列稀釋后,使菌落數(shù)約為105-106個/毫升,取一滴稀釋液滴于血球計數(shù)板內(nèi),在顯微鏡下直接計算細胞總數(shù)。
4、繪制生長曲線
以酵母菌細胞數(shù)的對數(shù)作為縱坐標,以培養(yǎng)時間作為橫坐標,畫出酵母菌的生長曲線。并分析酵母菌群體的生長規(guī)律。