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上海莼試生物技術(shù)有限公司
初級(jí)會(huì)員 | 第2年

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免疫熒光細(xì)胞化學(xué)方法的原理

時(shí)間:2015/8/28閱讀:242
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    免疫熒光細(xì)胞化學(xué)方法的原理是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的規(guī)律,把已知的抗原或抗體標(biāo)記上熒光素,制成熒光抗原或抗體,然后以它作為探針來(lái)檢測(cè)組織或細(xì)胞內(nèi)的相應(yīng)物質(zhì)。方法具體種類有直接法、間接法、夾心法和補(bǔ)體法等。在熒光顯微鏡下,根據(jù)其形成復(fù)合物所發(fā)的熒光,來(lái)確定判斷檢測(cè)物的來(lái)源、性質(zhì)和部位。

1、直接法:這是zui早的方法。其基本原理是用已知的抗體標(biāo)記上熒光素后成為特異性熒光抗體,染色時(shí)將該抗體直接滴在載玻片上進(jìn)行孵育,使之直接與載玻片上的抗原結(jié)合,在熒光顯微鏡下直接觀察,作出判斷。該方法評(píng)價(jià):簡(jiǎn)單易行、特異性高、快速方便,常用于腎活檢組織幾種免疫球蛋白的檢測(cè)和病原體的檢測(cè)。但其不足是只能檢測(cè)相應(yīng)的一種物質(zhì),敏感性較差,效果有時(shí)不理想,目前較少作為更多方面的檢測(cè)。

2、間接法:該法的基本原理是用特異性的抗體與切片中的抗原結(jié)合后,繼用間接熒光抗體,與前面的抗原抗體復(fù)合物結(jié)合,形成抗原抗體熒光復(fù)合物。在熒光顯微鏡下,根據(jù)復(fù)合物的發(fā)光情況來(lái)確定所檢測(cè)的抗原。該方法評(píng)價(jià):由于結(jié)合在抗原抗體復(fù)合物上的熒光素抗體增多,發(fā)出的熒光亮度強(qiáng),因而其敏感性強(qiáng)。目前本法應(yīng)用較廣泛,只需制備一種種屬熒光抗體,即可適用于多種*抗體的標(biāo)記顯示。

3、如果你有針對(duì)待查抗原一抗(熒光素標(biāo)記),而且你的待檢抗原表達(dá)也比較豐富的話,做直接法也未嘗不可。不過(guò)如果你不具備上述兩個(gè)條件的話,還是推薦你做間接法。

4、如果你做的是細(xì)胞骨架,那么就是用直接免疫熒光。如果是一般的蛋白表達(dá),這個(gè)要看有沒(méi)有試劑是直接標(biāo)記的;如果沒(méi)有,還是只能考慮間接熒光。直接熒光相對(duì)間接熒光可以避免非特異姓染色,當(dāng)然步驟也少了些。我做過(guò)細(xì)胞骨架的直接染色,效果很好。

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