人Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞永生化細(xì)胞專用培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)步驟:
細(xì)胞復(fù)蘇
1.將10ml移液管、移液槍、1ml槍頭、50ml離心管、T25培養(yǎng)瓶、酒精燈、廢液缸等物品放入超凈工作臺(tái),紫外燈照射30min后再通風(fēng)30min;
2.預(yù)熱培養(yǎng)基;
3.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái);
4.將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出;
5.放入一次性手套于37℃水浴鍋中快速晃動(dòng)使其融化;
6.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái);
7.吸取9ml培養(yǎng)基到50ml離心管中;
8.用1ml槍頭吸取解凍的細(xì)胞懸液于離心管中;
9.1000r/min,離心5min;
10.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái);
11.吸棄上清液;
12.吸取1ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶使細(xì)胞分布均勻,并做好標(biāo)記;
13.在顯微鏡下觀察復(fù)蘇的細(xì)胞密度及狀態(tài);
14.將細(xì)胞放回二氧化碳培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。