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467次本試劑盒僅供研討運用。
檢查規模:96T
2 IU/L -48 IU/L
運用意圖:
本試劑盒用于測定植物安排,細胞及其它有關樣本中菠蘿蛋白酶(Bromelain)含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中菠蘿蛋白酶(Bromelain)水平。用純化的菠蘿蛋白酶(Bromelain)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次參加菠蘿蛋白酶(Bromelain),再與HRP符號的菠蘿蛋白酶(Bromelain)抗體,構成抗體-抗原-酶標抗體復合物,通過*洗刷后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的效果下轉化成終究的。色彩的深淺和樣品中的菠蘿蛋白酶(Bromelain)呈正有關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過規范曲線核算樣品中菠蘿蛋白酶(Bromelain)濃度。
試劑盒構成
標本請求
1.標本收集后盡早進行獲取,獲取按有關文獻進行,獲取后應盡快進行實驗。若不能立刻進行實驗,可將標本放于-20℃保留,但應防止重復凍融
2.不能檢查含NaN3的樣品,因NaN3按捺辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作過程
1. 規范品的稀釋:本試劑盒提供原倍規范品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
2. 加樣:別離設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、規范孔、待測樣品孔。在酶標包被板上規范品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終究稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,悄悄晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗刷液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗刷:當心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗刷液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6. 加酶:每孔參加酶標試劑50μl,空白孔在外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗刷:操作同5。
9. 顯色:每孔先參加顯色劑A50μl,再參加顯色劑B50μl,悄悄震動混勻,37℃避光顯色10分鐘.
10. 停止:每孔加停止液50μl,停止反響(此刻藍色立轉)。
11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加停止液后15分鐘以內進行。
操作程序總結:
核算
以規范物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出規范曲線,依據樣品的OD值由規范曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用規范物的濃度與OD值核算出規范曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,核算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。
注意事項
1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可運用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保留。
2.濃洗刷液也許會有結晶分出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗刷時不影響成果。
3.各步加樣均應運用加樣器,并常常校正其準確性,以防止實驗誤差。一次加樣時刻控制在5分鐘內,如標本數量多,引薦運用排槍加樣。
4. 請每次測定的一起做規范曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于規范品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋必定倍數(n倍)后再測定,核算時請zui終乘以總稀釋倍數(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性運用,以防止穿插污染。
6.底物請避光保留。
7.嚴格按照說明書的操作進行,實驗成果斷定有必要以酶標儀讀數為準.
8.一切樣品,洗刷液和各種廢棄物都應按感染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
保留條件及有效期
1.試劑盒保留:;2-8℃。
2.有效期:6個月
請輸入賬號
請輸入密碼
請輸驗證碼
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