本試劑僅供研究使用  標(biāo)本：血清或血漿

試驗原理：

CD14試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.ELISA檢測試劑盒已知CD14濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進行檢測。先將CD14和生物素標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中CD14的濃度呈比例關(guān)系。

自備材料

1． 蒸餾水。

2． 加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。

3． 振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性

1． 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。

2． 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

操作注意事項

1． 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。

2． 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。

3． 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

4． 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

5． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

6． 洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。

7． 底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。

8． 加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。

9． 按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

ELISA檢測試劑盒樣品收集、處理及保存方法

1、 血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3、 細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4、 保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準(zhǔn)備

標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準(zhǔn)備，不能儲存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。

1． 洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

操作步驟

1． 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。

2． 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。

3． 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。

4． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

5． 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

6． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

7． 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。

8． 取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。

9． 在450nm波長處測定各孔的OD值。

局限

6號標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到的結(jié)果。

試劑盒性能

1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。

2. 特異性：不與人其它細(xì)胞因子反應(yīng)。

3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

結(jié) 果 判 斷 與 分 析

1、儀器值：于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），ELISA檢測試劑盒相應(yīng)的CD14標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的CD14含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。

3、檢測值范圍：0-80ng/ml

4、敏感度： 0.1 ng/ml

Mouse single stranded DNA Antibody,ssDNA ELISA Kit  小鼠抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體 X17991  96T
BRAK/CXCL14（Human Breast and kidney expressed chemokine,BRAK） ELISA Kit  人胸腎表達(dá)趨化因子 X17992  96T
（BAX）Rat Bcl-2 associated X protein,Bax ELISA Kit  大鼠Bcl-2相關(guān)X蛋白 X17993  96T
TNF- Alpha （Rabbit Tumor necrosis factor Alpha） ELISA Kit  兔子腫瘤壞死因子α X17994  96T
Mouse phosphatidylserine,PS ELISA Kit  小鼠磷脂酰絲氨酸 X17995  96T
TGF- Beta （Rabbit Transforming Growth factor Beta） ELISA Kit  兔子轉(zhuǎn)化生長因子β X17996  96T
ACTH ELISA Kit  魚促腎上腺皮質(zhì)激素 X17997  96T
sFAS/Apo-1（Rat soluble Factor-related Apoptosis,sFAS/Apo-1 ）ELISA Kit  大鼠可溶性凋亡相關(guān)因子 X17998  96T
BLC-1/CXCL13（Human B-Lymphocyte Chemoattractant 1,BLC-1） ELISA Kit  人B-淋巴細(xì)胞趨化因子 X17999  96T
CTAP III （Human connective tissue-activating peptide III ,CTAP III ） ELISA Kit  人結(jié)締組織活化肽Ⅲ X18000  96T
Annexin A2 human c ELISA Kit   人膜粘連蛋白 Ⅱ ELISA 試劑盒 X18001  96T
Mouse choline phosphoglyceride,PC/CPG ELISA Kit  小鼠膽堿磷酸酯 X18002  96T
ChAT （Rat Choline Acetyltransferase ） ELISA Kit  大鼠膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶 X18003  96T
bFGF （Rabbit basic fibroblast growth factor） ELISA Kit  兔子堿性成纖維細(xì)胞生長因子 X18004  96T
PGE2 （Rabbit Prostaglandin E2） ELISA Kit  兔子前列腺素E2 X18005  96T
FSH ELISA Kit  魚促卵泡素 X18006  96T
IL-7（Rat Interleukin-7） ELISA kit  大鼠白介素7 X18007  96T
Mouse Beta-Defensins, Beta-DF ELISA Kit  小鼠β-防御素 X18008  96T
M-CSFR（Human Macrophage Colony-Stimulating Factor Receptor,M-CSFR） ELISA Kit  人巨噬細(xì)胞集落刺激因子受體 X18009  96T
TUNEL  細(xì)胞凋亡原位檢測試劑盒（我公司提供代測服務(wù)） X18010  10人份
TUNEL   細(xì)胞凋亡原位檢測試劑盒（我公司提供代測服務(wù)） X18011  50人份
STK（Reat serine/threonine protein kinase,STK） ELISA Kit  大鼠絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酶 X18012  96T