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403次間接ELISA(酶聯免疫吸附試驗,酶聯免疫試劑盒) 本法主要用于檢測抗體。以鴨病毒性肝炎(DVH)抗體的ELISA(酶聯免疫吸附試驗,酶聯免疫試劑盒)為例,間接ELISA(酶聯免疫吸附試驗,酶聯免疫試劑盒)的操作程序如下。
(1) 材料
① 包被液、洗滌液、保溫液、底物液、終止液;
② DVH包被抗原、酶標抗抗體、陰性及陽性DVH參考血清;待檢鴨血清;
③ ELISA(酶聯免疫吸附試驗,酶聯免疫試劑盒)檢測儀、加樣器、聚苯乙烯微量板。
(2) 方法步驟
① 加抗原包被 → 4℃過夜,洗滌三次、拋干
② 加待檢血清 → 37℃ 2小時,洗滌三次、拋干
③ 加酶標抗體 → 37℃ 2小時,洗滌三次、拋干
④ 加底物液 → 37℃ 30分鐘,加終止液
⑤ 用ELISA(酶聯免疫吸附試驗,酶聯免疫試劑盒)檢測儀測定OD值,并計算出P/N比值。
(3) 結果判定 已知陽性血清與已知陰性血清的比值(P/N)≥2.1,而且已知陽性血清的OD值≥0.4;在上述條件成立的情況下,如果待檢血清與已知陰性血清的比值(P/N)≥2.1,而且待檢血清的OD值≥0.4,則判為陽性,否則判為陰性。
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