聯系電話
上海勁馬實驗設備有限公司
中級會員·17年
- 聯系人：
- 馮經理
- 電話：
- 021-60521817
- 手機：
- 13817140470
- 售后：
- 86-021-61107441
- 傳真：
- 86－021－64881400
- 地址：
- 上海市松江區漕河涇研展路455號B座
- 個性化：
- www.shjmsw.com
- 手機站：
- m.shjmsw.com
- 網址：
- www.shjmsw.com
掃一掃訪問手機商鋪
本期新聞中心應客戶要求，讓大家一起來圍觀解答新手做實驗遇到的問題解答：
以下由客戶自訴：
1.采用的是ELISA雙抗體夾心法測定尿液標本中人腎損傷分子-1（Kim-1）水平。某一國產96孔ELISA試劑盒（本次實驗只用了48孔，猜想應該不是試劑盒的原因，因為好幾個師姐用的都是這家的試劑盒，結果還可以，能做出標準曲線，且復孔間差異并不大）。
2.一次加樣時間：說明書上要求一次加樣時間控制在5分鐘內，而我的一次加樣時間基本在10min以上。
實驗前準備：
1.尿液樣本的收集與保存：-80℃冰箱保存尿液標本1年左右，1周前在冰中融化分裝，3000轉離心30min取上清液（因離心管與離心機不匹配，故將尿液從原離心管吸至相匹配的離心管中，原離心管下邊有尿沉渣，吸的時候未打勻而是直接吸的，不知道是否對結果有影響？），需要用的放在4度冰箱（做實驗用的標本也就是放在4度冰箱約1周的標本），暫時不需要用的放在-20度冰箱。
2.試劑盒從4度冰箱取出，將需要用的試劑及板拿出來放在實驗臺平衡45min。
3.尿液實驗前未做稀釋處理。
操作步驟：
1.標準品的稀釋與加樣：按照說明書，我采用的垂直加樣，只是加樣速度慢，盡量加至底部，不觸壁，不產生氣泡。
2.溫育說明書上要求30min，而我的大概是35min，是在培養箱中進行的。
3.洗滌：也是加樣速度慢，全部加樣后停了1min，甩干（甩到甩不出液體為止），然后在濾紙上拍干（拍到沒有液體流出為止），就這樣重復了5次。
4.顯色：剛開始培養箱溫度沒升至37度，我也先放里邊了，是等升至37度后開始計時的。
疑問：
1.為什么標準孔的濃度會出現如上圖的結果？
2.為什么復孔間的差異這么這么的大？
實驗中沒有少加或加錯樣，懇請各位戰友幫忙找原因，不勝感激！
1.為什么標準孔的濃度會出現如上圖的結果？ 你標準品也就120-80ng/L有些線性，可使后邊的40-10ng/L OD值又再次突然高上去了，且40-10ng/L的OD值復孔間偏差還算不大。我覺得你先從稀釋的角度看看吧，說明書提供的稀釋方法太麻煩，可能會導致操作時出現問題，你不如在干凈的EP管中按照標準品的比例關系進行稀釋，稀釋完后再統一加入酶標板孔中。
2.為什么復孔間的差異這么這么的大？ 我覺得兩方面原因，你標準品復孔差異大，可能跟稀釋手法有關。你的樣本OD值3復孔間有時會出現偏差較大的情況 可能跟洗板有關系，用洗板機洗板洗，可能與你尿樣未混勻也有關（雖然可能性很?。?。但是我覺得和你說的：“故將尿液從原離心管吸至相匹配的離心管中，原離心管下邊有尿沉渣，吸的時候未打勻而是直接吸的”沒有什么關系，畢竟你已經離心取上清了。
至于加樣時間5min還是10min，溫預30min，還是35min等等操作上與說明書略有差異的地方都不是出現你這種結果的直接原因，畢竟雙抗體夾心法的試劑盒對操作和時間沒有競爭法那么嚴格。
說句實話我看到這個試劑盒的說明書時我*驚呆了，首先看標準曲線：
上圖是勁馬公司人TIM-1/KIM-1的ELISA說明書提供的數據,RND的線性范圍有70倍左右，而你的試劑盒只有12倍，一般的雙抗體夾心法線性范圍都不會只有10倍左右；在看定量的試劑盒至少要有一個0點吧畢竟它代表了試劑盒包被抗體和酶標抗體的交叉反應情況（也就是試劑盒的背景），樣本定值時至少要減去0點在定量吧，可使你的試劑盒只有一個空白孔（不加酶標試劑）只能算作顯色液的背景。根本不能代表你試劑盒本身的背景情況。不知道你方不方便告知是什么牌子的試劑盒??zui后我想說一點：“猜想應該不是試劑盒的原因，因為好幾個師姐用的都是這家的試劑盒，結果還可以，能做出標準曲線，且復孔間差異并不大”這并不能*排除試劑盒的問題，畢竟你師姐的項目是否和你一樣？？就算一樣批號一樣嗎？
上海勁馬實驗設備有限公司長期供應酶免Elisa試劑盒、ELISA檢測試劑盒、免疫組化試劑盒、人Elisa試劑盒、大小鼠Elisa試劑盒、抗體抗原、各種系列ELISA檢測試劑盒，僅適用于科研，不適用于臨床診斷。公司提供免費代測，更好的為您服務。咨詢。
