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上海勁馬實驗設備有限公司 |  資料大小 |
277.8KB |
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人黑色素細胞抗體（MC Ab）試劑盒（ELISA）
使用說明書 貨號: SU-B10307
l 本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關液體樣 本中人黑色素細胞抗體（MC Ab）的含量。
l 有效期：6個月
l 保存條件：2-8℃
實驗原理
試劑盒采用一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被人黑色素細胞抗體（MC Ab）捕獲抗原的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并* 洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終 的黃色。顏色的深淺和樣品中的人黑色素細胞抗體（MC Ab）呈正相關。用酶標儀在450nm 波
長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。
樣本處理及要求
1. 血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測， 或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2 - 8°C 1000g離心20分鐘， 或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
3. 細胞培養物上清或其它生物標本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃ 或-80℃保存，但應避免反復凍融。 注：標本溶血會影響zui后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。
需要而未提供的試劑和器材
1. 酶標儀（450nm）
2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
4. 蒸餾水或去離子水
試劑盒組成
名稱 | 96 孔配置 | 48 孔配置 | 備注 |
微孔酶標板 | 8 孔×12 條 | 8 孔×6 條 | 無 |
標準品 | 0.3mL*6 管 | 0.3mL*6 管 | 無 |
樣本稀釋液 | 6mL | 3mL | 無 |
檢測抗體-HRP | 10mL | 5mL | 無 |
20×洗滌緩沖液 | 25mL | 15mL | 按說明書進行稀釋 |
底物 A | 6mL | 3mL | 無 |
底物 B | 6mL | 3mL | 無 |
終止液 | 6mL | 3mL | 無 |
封板膜 | 2 張 | 2 張 | 無 |
說明書 | 1 份 | 1 份 | 無 |
自封袋 | 1 個 | 1 個 | 無 |
備注：
1. 標準品濃度依次為：240、120、60、30、15、7.5 U/mL
2. 經過大量正常標本檢驗，標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內，實驗過程中 直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過zui大標準品濃度時，可用樣本稀釋液將標本 進行適當稀釋后再進行實驗。
注意事項
1. 嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室 溫 20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
2. 洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中 不要讓微孔干燥掉。
3. 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響 OD 值。
4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色，已經變藍的底物液不能使用。
5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。
6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。
7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞 試劑盒中反應試劑的生物活性。
9. 不能使用過期產品。
10. 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應管理好，按照規定的程序處理樣品和檢測裝置。
試劑準備
試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡后方可使用。
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。
操作步驟
1. 從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。
2. 設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品 50μL；
3. 樣本孔中加入待測樣本 50μL；空白孔不加。
4. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體
100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。
5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙 上拍干，如此重復洗板 5 次（也可用洗板機洗板）。
6. 每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。
7. 每孔加入終止液 50μL，15min 內，在 450nm 波長處測定各孔的 OD 值。
實驗結果計算
以所測標準品的OD值為橫坐標，標準品的濃度值為縱坐標，在坐標紙上或用相關軟件繪
制標準曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計算出樣品的濃度。
試劑盒性能
1. 檢測范圍：7.5 U/mL – 240 U/mL。
2. 靈敏度：zui低檢測濃度小于 1.0 U/mL。
3. 特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
4. 重復性：板內、板間變異系數均小于 15%。
