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細(xì)胞轉(zhuǎn)染 實(shí)驗(yàn)方法
細(xì)胞轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)染技術(shù)以HeLa細(xì)胞為例
Day 1: HeLa細(xì)胞傳代入24孔板3個(gè)孔，1ml10％FBS的DMEM培養(yǎng)，密度以使其第2天能生長(zhǎng)至70％左右面積為宜。
Day 2:
1、轉(zhuǎn)染液的配制：
A液：2×1μl lipofectamine Gibco 滴入 2×50μl無(wú)血清培基中，混勻后靜置。
B液：9.36μl MMP14-siRNA (4рmol/μl) 和9.36μlβ－gal-siRNA (4рmol/μl)分別與50μl無(wú)血清培基混勻后靜置。
2、待A液靜置5分鐘時(shí)，取50μlA液分別滴入B液的兩組中?；靹?，靜置15分鐘時(shí)，開(kāi)始準(zhǔn)備細(xì)胞。
3、棄掉原細(xì)胞培養(yǎng)液，用2ml 1×PBS加入培養(yǎng)皿中，前后左右傾斜培養(yǎng)皿，洗細(xì)胞一次，盡量吸凈PBS。轉(zhuǎn)染混合液中分別補(bǔ)100μl無(wú)血清培基混勻，馬上滴入洗好的細(xì)胞上。靜置約2分鐘，放入37℃孵箱中。另設(shè)細(xì)胞陰性對(duì)照組，只用無(wú)血清培基處理。
4、轉(zhuǎn)染后4小時(shí)，補(bǔ)800ml 15％FBS的DMEM，放入37℃孵箱中。
Day 5:轉(zhuǎn)染后70小時(shí)準(zhǔn)備侵襲實(shí)驗(yàn)。
步驟見(jiàn)*部分，不同之處在于Matrigel為1mg/ml 30μl。
Day 8:侵襲實(shí)驗(yàn)觀察12小時(shí)后，取出染色。
上海勁馬實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司提供免疫組化服務(wù)，免疫共沉淀服務(wù)，Elisa實(shí)驗(yàn)服務(wù)。如需咨詢?cè)斍椋?qǐng)。
