88国产精品视频一区二区三区,久久精品AⅤ无码中文字字幕重口,久久偷看各类WC女厕嘘嘘,好男人资源在线看免费的

上海勁馬實驗設備有限公司

中級會員·17年

聯系電話

13817140470

您現在的位置: 首頁> 技術文章 > ELISA實驗的核心三要素:不可-或缺的三大試劑

代理品牌

胎牛血清

ELISA試劑盒

放免試劑盒

生物試劑

酶聯免疫試劑盒

USP試劑

其他方法試劑盒

抗體

對照品

培養基

免疫化學產品

細胞株

中級會員·17年
人:
馮經理
話:
021-60521817
機:
13817140470
后:
86-021-61107441
真:
86-021-64881400
址:
上海市松江區漕河涇研展路455號B座
化:
www.shjmsw.com
站:
m.shjmsw.com
址:
www.shjmsw.com

掃一掃訪問手機商鋪

ELISA實驗的核心三要素:不可-或缺的三大試劑

2025-3-24  閱讀(272)

分享:

一、ELISA基本原理

ELISA通過抗原-抗體的特異性結合,利用酶催化底物顯色反應進行定量或定性分析。常見的類型包括直接法、夾心法和競爭法,但其核心步驟均依賴于以下三類關鍵試劑:

 

二、核心試劑一:包被抗體/抗原——實驗的“基石"?

作用?:作為固相載體(微孔板)的固定化分子,捕獲目標物。

選擇要點?:

純度與活性?:高純度避免交叉反應,確保結合效率(建議使用單克隆抗體)。

包被濃度優化?:預實驗確定最佳濃度(通常1-10 μg/mL),濃度過高易導致空間位阻。

緩沖液選擇?:碳酸鹽緩沖液(pH 9.6)常用,避免含BSA或Tween的溶液。

 

常見問題?:

非特異性結合?:增加封閉步驟(如5%脫脂牛奶或BSA封閉1小時)。

包被不均?:4℃過夜包被優于室溫2小時,提高結合穩定性。

 

三、核心試劑二:酶標抗體——信號的“放大器"?

 作用?:與目標物結合后催化底物顯色,將生物學信號轉化為光學信號。

酶的種類?:

HRP(辣根過氧化物酶)?:常用,底物為TMB(顯藍色)或OPD(顯黃色),靈敏度高。

AP(堿性磷酸酶)?:底物為pNPP(顯黃色),適用于磷酸鹽緩沖體系。

標記效價?:高效價減少用量,降低成本(建議效價≥1:5000)。

保存條件?:HRP需避光保存,避免反復凍融(分裝后-20℃儲存)。

注意事項?:避免與疊氮鈉(HRP抑制劑)共用,可選擇ProClin 300作為防腐劑。

 

四、核心試劑三:底物顯色系統——結果的“可視化"?

作用?:酶催化底物生成有色產物,通過吸光度值定量目標物濃度。


常用底物對比?:

image.png

優化技巧?:

顯色時間控制:室溫避光反應10-30分鐘,避免過度顯色導致背景升高。

終止時機:當標準品最高濃度孔顯色明顯時立即終止。

 

五、實驗流程關鍵步驟?

包被?:100 μL/孔,4℃過夜。

封閉?:含1% BSA的PBS,37℃ 1小時。

加樣?:樣本梯度稀釋,37℃孵育1小時。

酶標抗體孵育?:37℃ 1小時,洗滌3次(0.05% Tween-20 PBS)。

顯色與終止?:TMB顯色15分鐘,2M H?SO?終止。

讀數?:雙波長檢測(450 nm/630 nm校正孔間誤差)。

 

六、常見問題與解決方案?

高背景噪音?:增加洗滌次數(5次以上),檢查封閉液是否失效。

低信號值?:優化包被濃度或延長底物孵育時間。

孔間差異大?:使用多通道移液器,確保加樣一致性。

會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標簽最多10個字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復您~
產品對比 二維碼 在線交流

掃一掃訪問手機商鋪

對比框

在線留言