人ELISA試劑盒用此法判斷結果要求實驗條件十分恒定，試劑的制備必須標準化，陽性和陰性的對照品應符合一定的規格，須配用精密的儀器，并嚴格按規定操作。陽性判定值公式中的常數是在這特定的系統中通過對大量標本的實驗檢測而得到的?，F舉某種檢測 HBsAg 的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對照品為不含HBsAg 的復鈣人血漿，陽性對照品HBsAg 的含量標明為P=9±2ng /ml。每次試驗設2 個陽性對照和3 個陰性對照。
測得A 值后，先計算陰性對照A 值的平均數（NC X ）和陽性對照A 值的平均數（PCX），兩個平均數的差（P-N）必須大于一個特定的數值（例0.400），試驗才有效。3 個陰性對照A 值均應≥0.5×NCX，并≤.5 ×NCX，如其中之一超出此范圍，ELISA試劑盒則棄去，而已另兩個陰性對照重新計算NCX；如有兩個陰性對照A 值超出以上范圍，則該次實驗無效。
標本 A 值＞陽性判定值的為陽性，小于陽性判定值的為陰性。應注意的是，式中0.05 為該試劑盒的常數，只適合于該特定條件下，而不是對各種試劑均可通用。根據以上敘述可以看出，在這種方法中陰性對照和陽性對照也起到試驗的質控作用，試劑變質和操作不當均會產生"試驗無效"的后果。
b.標本/陰性對照比值在競爭法ELISA試劑盒中，陰性孔呈色深于陽性孔。陰性呈色的強度取決于反應中酶結合物的濃度和加入競爭抑制物的量，一般調節陰性對照的吸光度在.0-.5 之間，此時反應zui為敏感。競爭法 ELISA 不易用自視判斷結果，因肉眼很難辨別弱陽性反應與陰性對照的顯色差異，一般均用比色計測定，讀出S、P 和N 的吸光值。計算方法主要也有兩種，即陽性判定值法和抑制率法。
