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上海一研生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第11年

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斑點(diǎn)氣單胞菌PCR檢測(cè)試劑盒對(duì)照反應(yīng)

時(shí)間:2020/5/21閱讀:1038
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          PCR完成后,建議將反應(yīng)液于1000× g (大約4000 rpm) 離心1~3 min以沉淀血細(xì)胞碎片,之后取上清進(jìn)行下游分析。該步驟可有效去除多種血液組分。當(dāng)使用高濃度血液模板時(shí)此步尤為重要,因?yàn)榻?jīng)過(guò)PCR循環(huán),反應(yīng)管中會(huì)存在大量的血細(xì)胞碎片。這些碎片會(huì)干擾下游的檢測(cè),如瓊脂糖電泳檢測(cè)。注意:由于血液本身的原因,PCR 結(jié)束后在 PCR 管的底部會(huì)出現(xiàn)透明凝膠狀物質(zhì),此為正常現(xiàn)象。

斑點(diǎn)氣單胞菌PCR檢測(cè)試劑盒對(duì)照反應(yīng)

在PCR結(jié)果分析時(shí),不管是陽(yáng)性結(jié)果或陰性結(jié)果,如果沒(méi)有對(duì)照反應(yīng),都不能確定結(jié)果是否可靠。為了便于后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析,建議在進(jìn)行PCR時(shí),設(shè)置陽(yáng)性和陰性PCR對(duì)照反應(yīng)以便于排除假陽(yáng)性或假陰性的干擾。

a)模板DNA:選用樣本純化的DNA。

b)引物的選擇:建議選擇該樣本較易擴(kuò)增的基因的引物,如 β-actin 基因或 GAPDH 等。

4.2 陰性對(duì)照

PCR反應(yīng)體系被污染會(huì)導(dǎo)致PCR結(jié)果出現(xiàn)假陽(yáng)性,需要設(shè)置陰性對(duì)照來(lái)排除。將使用的移液器槍頭浸泡在2× Blood Master Mix中,添加引物,ddH2O進(jìn)行PCR擴(kuò)增;另取ddH2O作為模板,用目的基因引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,以排除PCR體系是否被污染和實(shí)驗(yàn)是否有其他污染源。

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