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培養基的基本原理

時間:2016/4/11閱讀:7528
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   在植物病理學研究工作中經常要使用各種不同的培養基。培養基是按照生物生長繁殖所需要的各種營養,用人工方法配制而成的營養基質。其中含有碳源、氮源、無機鹽、維生素以及水分等。微生物在培養基上生長繁殖還必須在zui適pH范圍內才能生長得更好,因此,對不同種類的微生物應將培養基調節到一定的pH范圍。
培養基的種類很多,不同的微生物所需要的培養基不同。依物理性狀可分為液體的、固體的和半固體的三種。固體培養基是在液體培養基中加入1.5%--2%的瓊脂,半固體培養基是加入0.2%~0.5%的瓊脂。瓊脂又稱瓊膠或洋菜,是由海藻加工而成,其化學性質穩定一般微生物均不能分解利用。它在95℃熱水中溶化成溶膠,冷卻到45℃以下時又重新凝固,故一般實驗中常用它作為凝固劑。
   根據營養物質來源的不同,培養基可分為天然、半合成和合成培養基三類。天然培養基是以自然界原有的有機物為材料經滅菌后制成,如馬鈐薯、胡 蘿卜水果、大麥粒、高粱粒等。半合成培養基中既有一些天然的有機物質,又有一些成分簡單或明確的化合物。如常用的馬鈴薯葡萄糖培養基(PDA)、肉汁胨培養基(NA)等。合成培養基是由一些成分明確的化合物配制而成的,無任何成分不明確的物質,常用于研究微生物的生理生化性狀,如查氏(Czapek)培養基等。
根據培養基用途不同,可分為生長繁殖培養基、富集培養基、貯存培養基、選擇性培養基和鑒別培養基等。在植物病理學研究中,zui常用培養基有馬鈴薯葡萄糖培養基,主要用于分離培養病原真菌。
   在培養基配制完之后,必須經過滅菌,以便*殺死其中原有的一切微生物。
  三、材料、試劑與儀器
 1.材料馬鈴薯。
 2.試劑 葡萄糖、瓊脂等。
 3.儀器與用品 高壓蒸汽滅菌鍋、pH試紙(或酸度計)、試管、鋁鍋、攪拌棒、三角瓶、燒杯、漏斗、量筒、紗布、棉花、天平等。
 四、操作步驟
  PDA培養基(馬鈴薯葡萄糖培養基)配方:去皮馬鈴薯200g 葡萄糖20g瓊脂15—20g蒸餾水1000ml 自然pH。在PDA培養基配方中也可用蔗糖代替葡萄糖,這樣配制的培養基也稱為PSA培養基。
 (1)稱量。稱量去皮馬鈴薯200g,葡萄糖20g,瓊脂15--20g。提示:瓊脂加入的量取決于瓊脂的質量,質量好的15g就夠了,質量差的
  應適當增加。另外,在夏天氣溫較高時,適當增加用量。
  (2)將馬鈴薯切成小塊,放入鍋中,加水1000ml,煮沸30min。用紗布濾去馬鈴薯殘渣。
  3)將馬鈴薯濾液放回鍋中,加入瓊脂,加熱熔化。
提示:在瓊脂熔化的過程中,需要用玻璃棒不斷攪拌,并控制火力不要使培養基溢出或燒焦。
  (4)加入葡萄糖。葡萄糖溶解后,加入適量的水以補充加熱過程中損失的水分,定容至1000ml。
提示:通常在制作培養基的鍋內用紅藍鉛筆標記出不同體積的刻度,如1000ml、2000ml等,在定容時直接將水加至已標記的刻度即可。
  (5)分裝。根據不同的實驗目的,可將配制的培養基分裝于試管內或三角瓶內。分裝試管,其量為管高的1/5,滅菌后制成斜面。分裝三角瓶的容量以不超過三角瓶容積之一半為宜。
  (6)加塞。在管口或瓶口塞上棉塞。棉塞要用未脫脂的經彈松的棉花,棉塞可過濾空氣,防止雜菌侵入并可減緩培養基水分的蒸發,故在植物病理學研究工作中普遍使用。
正確的棉塞是形狀、大小、松緊與管口或瓶口*適合,過緊時妨礙空氣流通,操作不便;過松則達不到濾菌的目的,且棉塞過小往往容易掉進試管內。正確的棉塞頭較大,約有1/3在外,2/3在試管內。分裝過程中注意不要使培養基沾染在管(瓶)口上以免浸濕棉塞,引起污染。如不使用棉塞也可用橡皮塞或特制的金屬、塑料試管帽,為讓空氣可以自由進出,橡皮塞不要過緊,滅菌前應夾一紗線在管口。
  (7)包扎。加塞后,將試管用線繩捆好,再在棉塞外包一層牛皮紙,以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞,其外再用一道線繩扎好。用記號筆注明培養基名稱、配制日期、組別、制作人等。 
  (8)滅菌。將上述培養基以0.103MPa,121C,高壓蒸氣滅菌20min。
  (9)擱置斜面。將滅菌的試管培養基冷至5013左右(以防斜面上冷凝水太多),將試管口端擱在玻棒或其他合適高度的器具上,擱置的斜面長度以不超過試管總長的一半為宜。
培養基經滅菌后,必須放在37C溫箱培養24h,無菌生長者方可使用。PDA培養基一般不需要調pH。對于要調節pH的培養基,一般用pH試
紙測定其pH。如果培養基偏酸或偏堿時,可用lmol/LNaOH或lmol/LHCL溶液進行調節。調節時應逐滴加入NaOH或HCl溶液,防止局部過酸或過堿破壞培養基成分。
   提示:pH不要調過頭,以避免回調而影響培養基內各離子的濃度。配制低pH的瓊脂培養基時,若預先調好pH并在高壓蒸汽下滅菌,則瓊脂因水解不能凝固。因此,應將培養基的成分和瓊脂分開滅菌后再混合,或在中性pH條件下滅菌,再調整pH。

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