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測(cè)定氨基酸含量

時(shí)間：2016/2/26閱讀：1393

水溶液中的氨基酸為兼性離子，因而不能直接用堿滴定氨基酸的羧基。甲醛可與氨基酸上的—N+H3結(jié)合，形成—NH—CH2OH、—N(CH2—OH)2 等羥甲基衍生物，使N+H3上的H+游離出來(lái)，這樣就可以用堿滴定N+H3放出H +，測(cè)出氨基氮，從而計(jì)算氨基酸的含量。ELISA試劑盒

若樣品中只含有單一的已知氨基酸，則可由此法滴定的結(jié)果算出氨基酸的含量。若樣品中含有多種氨基酸（如蛋白質(zhì)水解液），測(cè)不能由此法算出氨基酸的含量。

與甲醛作用后，生成的化合物不穩(wěn)定，導(dǎo)致滴定后結(jié)果偏低；含酚基結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致滴定結(jié)果偏高。

測(cè)定氨基酸含量的材料、試劑與器具

（一）試劑

1、0.5%酒精溶液

稱0.5g溶于100ml60%酒精中。

2、0.05%溴藍(lán)溶液

取0.05溴麝行草酚藍(lán)溶于100ml 20%乙醇溶液中。

3、1%溶液

取1g溶于100ml蒸餾水。 ELISA試劑盒

4、標(biāo)準(zhǔn)0.100mol/L 氫氧化鈉溶液

5、中性甲本醛溶液

取50ml，加0.5%指示劑約3ml，滴加0.1mol/LnaOH溶液，使溶液呈微粉紅色，臨用前中和。

（二）實(shí)驗(yàn)器具

1、錐形瓶 2、堿式滴定管

3、移液管洗耳球 4、天平

5、容量瓶 6、試劑瓶

7、量筒 8、玻棒與燒杯

注意事項(xiàng) ：利用甲醛滴淀法可以用來(lái)測(cè)定蛋白質(zhì)的水解程度。隨著蛋白質(zhì)水解度的增加，滴定值也增加，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)水解完成后，滴定值不再增加。ELISA試劑盒

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測(cè)定氨基酸含量

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