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小鼠肝星狀細胞永生化細胞專用培養基操作步驟

時間:2025/5/15閱讀:75
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小鼠肝星狀細胞永生化細胞專用培養基操作步驟

** 細胞傳代與凍存**

當細胞密度達到80%-90%時即可進行傳代。棄去舊培養基,用預熱的PBS輕柔洗滌兩次,加入0.25%(含EDTA)消化1-2分鐘。鏡下觀察細胞變圓后,立即加入含血清的培養基終止消化,輕柔吹打形成單細胞懸液。離心(1000rpm, 5分鐘)后棄上清,用新鮮培養基重懸細胞,按1:2至1:3比例分瓶培養。

**質量控制要點**

* **形態觀察:** 永生化肝星狀細胞應呈現長梭形或多角形,胞質豐富,核仁明顯。若出現細胞變圓、脫落或大量空泡,提示培養條件異常。

* **生長曲線:** 定期繪制生長曲線,監測細胞增殖速率。異常增殖或停滯可能表明培養基失效或細胞污染。

* **功能驗證:** 建議定期通過α-SMA免疫熒光染色或膠原分泌檢測驗證細胞活化狀態,確保其保持星狀細胞特性。

**7. 注意事項**

* **無菌操作:** 所有操作需在超凈臺中進行,避免污染。

* **培養基保存:** 培養基4℃保存不超過2周,避免反復凍融。

* **細胞狀態:** 永生化細胞雖可長期培養,但建議定期更換新鮮凍存細胞,避免遺傳漂變。

* **實驗記錄:** 詳細記錄培養基批次、細胞代數和實驗條件,確保實驗可重復性。

**8. 常見問題與解決方案**

* **細胞貼壁不良:** 檢查培養瓶是否經過包被,或增加血清濃度至15%。

* **增殖緩慢:** 確認培養基新鮮度,或嘗試添加2mM L。

* **污染處理:** 立即丟棄污染細胞,消毒培養環境,啟用新批次培養基。

(注:具體操作參數可根據實驗室條件和細胞株特性進行優化。)




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