膠原酶

1．用滅菌的*或剪刀將組織切成3-4mm大小碎塊。用Hanks*（HBSS）將組織碎塊清洗數次。

2．加入膠原酶（50-200單位/ml膠原酶HBSS）。

3．在37℃ 下孵育4-18小時。加入3mM CaCl2 可以提高解離效率。

4．用滅菌的不銹鋼網或尼龍網過濾細胞懸浮液，將離散的細胞和組織片段與大塊的組織碎片分離。如需進一步解離，可向組織片段中加入新鮮的膠原酶。

5．通過離心HBSS清洗細胞懸浮液數次。

6．用培養基重懸細胞。計算細胞個數，然后接種細胞進行培養。

分散酶

1．用滅菌的*或剪刀將組織切成3-4mm大小碎塊。用不含鈣鎂離子的*清洗組織碎塊數次。

2．加入分散酶（0.6-2.4單位/ml分散酶不含鈣鎂的*）。

3．在37℃下孵育20分鐘至數小時。

4．用滅菌的不銹鋼網或尼友網過濾細胞懸浮液，將離散的細胞和組織片段與大塊的組織碎片分離。如需進一步解離，可向組織片段中加入新鮮分散酶。

5．通過離心*清洗細胞懸浮液數次。

6．用培養基重懸細胞。計算細胞個數，然后接種細胞進行培養。

*

1．先去除無關組織，然后用滅菌的*或剪刀將組織切成3-4mm大小碎塊。通過在不含鈣鎂的*進行重懸來清洗組織碎塊。待組織碎塊沉降后去掉上清液。重復清洗2-3次。

2．將裝有組織碎塊的容器置于冰上，去掉所有上清液。在不含鈣鎂的*中加入0.25%*（每100mg組織大約需要1ml *）。

3．在4℃ 下孵育6-18小時，使低活性的*盡量滲入組織。

4．緩慢倒掉*。在37℃ 下將殘余的*與組織碎塊共同孵育20-30分鐘。

5．向組織碎塊加入溫熱的*培養基，并輕輕地吹吸以分散組織。如果使用無血清培養基。還應加入大豆*抑制劑。

6． 用滅菌的不銹鋼網（100-200μm）過濾細胞懸浮液，直至所有組織*散開。計算細胞個數，然后接種細胞進行培養。