人類外周血淋巴細胞培養
通常情況下哺乳動物外周血中是沒有分裂細胞的，只有在宜昌情況下才能發現。外周血中的小淋巴細胞幾乎都處于G1期貨G0期的非增殖狀態。太歪培養時經一定劑量的植物血凝集素（PHA)刺激，T淋巴細胞可轉變為淋巴母細胞，重新進入增殖周期，進行有絲分裂。外周血中淋巴細胞經過68-72小時（三個周期）的短期培養，即可產生大量的增殖期細胞群。用*（細胞分裂阻斷劑）積累分裂相，可使處在分裂期的淋巴細胞停留在分裂中中期或在中期，從而獲得足夠的可供分析的中期分裂相。
1、培養液配制（在超凈工作臺內無菌操作）
每個培養瓶（容積30ml）中加入5ml培養液，其中含：
RPMI1640 4ml
滅活小妞血清 1ml、
PHA 2.5mg
* 500U
* 500ug
依次將上訴試劑加入培養瓶中，反復吹打使其混合均勻，用5%NaHCO3調節培養基的PH至7.2-7.4.
2、血樣本的采集 先以碘酒和75%乙醇溶液消毒皮膚。用2ml滅菌注射器吸取月0.2ml肝素，作精美穿刺，抽取外周靜脈血1ml。轉動鎮痛以混勻肝素。
3、接種 常規消毒后，立即將針頭插入滅菌小瓶內，送入超凈工作臺，在火焰旁將血液滴入2-3個盛有5ml培養液的培養瓶內，每瓶0.2-0.3ml（6號針頭45度傾斜，約20滴）蓋上橡皮塞，輕輕搖動以混勻。貼好標簽，將培養瓶放在37℃恒溫箱內靜置培養72小時。
4、實驗準備
1、材料 人外周靜脈血（肝素抗凝）
2、培養基：RPMI1640，按說明書配制后抽濾、分裝，凍存備用。
3、小牛血清：冰凍保存，用時在56℃水浴條件下滅活。
4、植物血凝集素(PHA)：按說明書要求使用。
5、抗生素：*：50000u/ml，*：50000ug/ml，用無菌生理鹽水配制。培養液中的終濃度為100u/ml5%NaHCO3溶液。
器材 超凈工作臺，37℃恒溫培養箱，酒精燈，*（1ml、2ml、5ml）針頭、培養瓶、橡皮塞、75%乙醇溶液棉球，*、離心機，定時鐘，試管架、*子。
注意事項
1、PHA是體外淋巴細胞培養成敗的關鍵問題，因此要考慮它的質量和濃度。鹽水提取物一般冷凍保存的時間不宜過長，時間成了效價降低。濃度一般用1%=2%，每毫升培養液加0.2-0.4ml濃度過高可能會導致紅細胞凝集
2、培養箱的溫度應控制在（37±0.5℃），溫度過高或過低俊輝影響細胞生長。
3、培養基的ph應該在7.2-7.4左右，低了細胞生長不良，高了細胞則會出現輕度的固縮。
