大鼠丙酮酸脫氫酶激酶1(PDK1)說明書下載

實驗原理：
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠丙酮酸脫氫酶激酶1(PDK1)水平。用純化的
大鼠丙酮酸脫氫酶激酶1(PDK1)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次
加入丙酮酸脫氫酶激酶1(PDK1)，再與HRP 標記的丙酮酸脫氫酶激酶1(PDK1)抗體結合，
形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催
化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的丙酮酸脫氫酶
激酶1(PDK1)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計
算樣品中大鼠丙酮酸脫氫酶激酶1(PDK1)濃度。

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2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣
品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣
品zui終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混
勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液：將30（48T 的20 倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T 的20 倍）倍稀釋后備用。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此
重復5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應在加終止
液后15 分鐘以內進行。

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