以下是細胞的訂購信息:
英文簡稱:CHO-K1細胞
產品名稱:中國倉鼠卵巢細胞;CHO-K1
規格:T25
形態特性:上皮樣
生長特性:貼壁生長
特征特性:1957年,PuckTT從成年中國倉鼠卵巢的活檢組織建立了CHO細胞,CHO-K1是CHO的一個亞克隆。CHO-K1的生長需要。
培養條件:DMEM+10%FBS
傳代方法:1:2傳代
貨號:CS-X63210
細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
細胞培養的優點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據要求可始終保持細胞活力,并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態、結構、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養一定代數后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。
注意事項:
(1)凍存前細胞狀態,細胞在對數生,細胞密度適合,剛剛發生細胞融合,過密或連成片的細胞狀態不好,而且消化時不容易分散;
(2)凍存的密度不宜過低,10的6次方-7次方的數量級比較好,我凍存的細胞一般T25培養瓶(5*107),一瓶凍一管(1.5ml凍存管),10cm培養皿(大概10的8次方個細胞)分成兩管。
(3)消化和吹打,切忌消化過度,吹打不可太用力,不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養基吹打哦,不是加入凍存液再吹打。
(4)離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對于腫瘤細胞株而言要求不是很嚴格,我從10%-90%都用過,問題不大,個人認為10%-20%可以了,能節約處就節約點嘛!另外,凍存液可以在處理細胞前配置,放在4度冰箱預冷。細胞離心后直接用預冷的凍存液重懸,移入凍存管。
(5)關于“慢凍”,傳統的方法,LLC細胞凍存管用棉花包好,4度2h,-20度2h或更長,-80度過夜,最后液氮。對于條件較好的實驗室和細胞凍存數量多的實驗室,使用程序降溫盒,內裝異丙醇,在-80度并內可以逐漸降溫,很方便,省了包棉花、4度、-20度了。
噬相關基因AMBRA1抗體 AMBRA1抗體
脊髓小腦失調癥蛋白1抗體 ATXN1/Ataxin-1抗體
乙酰羧化酶抗體 Acetyl CoA Carboxylase抗體
細胞核重定位及紡錘體檢查點蛋白AMN1抗體 AMN1抗體
天連接糖基化11抗體 ALG11抗體
細胞衰老相關蛋白ASF1A抗體 ASF1A抗體
氨基糖苷類磷酸結構域蛋白抗體 AGPHD1抗體
唾液酸糖蛋白受體1抗體 ASGPR1抗體
芳香基硫酸酯酶F抗體 ARSF抗體
A激酶錨定蛋白5抗體 AKAP5抗體
小腦脊髓共濟失調蛋白3抗體 ATXN3L抗體
ASTE1蛋白抗體 ASTE1抗體
微絲相關蛋白1抗體 AFAP抗體
芳基硫酸酯酶B抗體 ARSB抗體
γ氨基丁酸轉氨酶抗體 ABAT抗體
共濟失調蛋白2結合蛋白1抗體 A2BP1抗體
腫瘤壞死因子α轉換酶 ADAM17抗體
芳香烴受體核轉錄蛋白2抗體 ARNT2 抗體
AlkB同源蛋白8抗體 ABH8抗體
ABI基因家族成員3結合蛋白抗體 ABI3BP抗體
Rho GTP酶激活蛋白20抗體 ARHGAP20抗體
含錨蛋白重復序列-細胞因子信號抑制物盒蛋白家族10抗體 ASB10抗體
乙醛脫氫酶1蛋白家族L1抗體 ALDH1L1抗體
軸抑制蛋白2抗體 Axin 2抗體
血管生成素相關蛋白6抗體 ANGPTL6抗體
Muellerian繆勒管激素抑制因子抗體 AMH抗體
蛋白激酶受體A8抗體 EphA8抗體
脂肪酰家族成員1抗體 Acetoacetyl-CoA synthetase抗體
蛤弧菌探針法熒光定量PCR試劑盒 Vibrio tapetis
創傷弧菌探針法熒光定量PCR試劑盒 Vibrio vulnificus
田鼠痘病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 Volepox Virus
多瘤病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 Washington University Polyomavirus(WUPyV)WU
韋塞爾斯布朗病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 Wesselsbron Virus
白斑綜合癥病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 White Spot Syndrome Virus(WSSV)
高首鱘虹彩病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 White Sturgeon Iridovirus(WSIV)
RT-(RT-)牛羚關聯惡性卡他熱病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 Wildebeest-associated Malignant Catarrhal Fever Virus (WA-MCF)
沃爾巴克氏菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒 Wolbachia spp.
班氏絲蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 Wuchereria bancrofti
加州立克次體探針法熒光定量PCR試劑盒 Xenohaliotis californiensis
苛養木桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒 Xylella fastidiosa
木絲霉探針法熒光定量PCR試劑盒 Xylohypha bantania
亞巴猴腫瘤病毒病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 Yaba Monkey Tumor Virus(YMTV)
酵母菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒 Yeast
CHO-K1細胞小腸結腸炎耶爾森菌探針法熒光定量PCR試劑盒 Yersinia enterocolitica
鼠疫耶爾森菌(鼠疫桿菌)探針法熒光定量PCR試劑盒 Yersinia pestis
假結核耶爾森菌探針法熒光定量PCR試劑盒 Yersinia pseudotuberculosis
魯氏耶爾森菌探針法熒光定量PCR試劑盒 Yersinia ruckeri
耶爾森菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒 Yersinia spp.
副溶血性弧菌//三重探針法熒光定量PCR試劑盒 toxR/tdh/trh
實驗報告
一、產分離與培養:
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗(Abbioscience公司),然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗(嘉美生物公司), 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡(Leica公司)下觀察圖像并拍照。