螢火蟲熒光素酶報告基因檢測試劑盒
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螢火蟲熒光素酶報告基因檢測試劑盒 | 100次 | 詢價 |
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報告基因檢測是真核基因表達調控研究的常用方法。由于檢測光量子的方法非常敏感，采用生物發光（bioluminescent）法，是報告基因檢測常用的有效手段。熒光素酶（luciferase）催化底物熒光素（luciferin）的轉化，發射出光子。螢火蟲熒光素酶（Firefly luciferase）催化的發光反應，具有很好的線性濃度范圍（7~8個數量級），酶的檢測靈敏度達到10-18~10-20 mol。本試劑盒采用通用裂解緩沖液（Universal Lysis Buffer，ULB），能與其他類型的報告基因檢測和蛋白含量檢測兼容；優化的酶反應體系，使發光反應持續數十分鐘，以便于手工操作多個樣品。可與海腎熒光素酶報告基因檢測試劑盒共同使用，進行一體化的雙熒光素酶檢測。該產品特點如下：
1. 高度靈敏：可檢測10-18~10-20 mol螢火蟲熒光素酶
2. 線性范圍寬：線性范圍達到7~8個數量級
3. 快速簡便：特別適合于高通量篩選
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環狀的兩條互補鏈不會*分離，當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調節其pH至中性時，變性的質粒DNA又恢復原來的構型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復性而形成纏連的網狀結構，通過離心，染色體DNA與不穩定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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