中文名稱：pET-N-GST-PreScission質粒
英文名稱：pET-N-GST-PreScission Plasmid
產品規格：1μg|100μg
發貨周期：1～3天
產品貨號：BJ-F0164713
生物醫學實驗中，常常需要從液體樣品(如血漿，培養基)中純化病毒，但由于病毒顆粒十分細小，傳統的分離方法是使用長時間超速離心才能將其從液體樣品中分離出來，此操作非常繁瑣，并且病毒在此過程中容易變性。為了克服傳統方法的缺點，本公司開發了本產品。產品介紹：
pET-N-GST-PreScission是一種用于表達N端含有GST-tag的目的蛋白的原核表達質粒。本質粒N端GST標簽后含有PreScission酶切位點，可通過PreScission Protease切除N端的GST標簽。本質粒為卡那抗性。 本質粒含有T7啟動子/lac操縱子，可以在異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的誘導下高效啟動目的蛋白表達。在多克隆位點的前面有一個GST標簽的編碼序列。因此在多克隆位點根據讀碼框插入目的基因就可以表達N端含有GST標簽的目的蛋白。 本載體在N端GST標簽與多克隆位點之間含有PreScission蛋白酶識別的八肽序列LEVLFQGP，對應的核酸序列為CTGGAAGTTCTGTTCCAGGGGCCC，因此在目的蛋白純化后可以用PreScission Protease切除N端的GST標簽。PreScission蛋白酶酶切發生在八肽序列的Q和G之間，因此在酶切去除GST標簽的時候目的蛋白的N端留下兩個額外的氨基酸殘基GP。 通常可以采用如GoldBalb GST-tag Purification Resin和GST標簽蛋白純化試劑盒等純化本質粒表達的目的蛋白，也可以使用GST抗體檢測和少量地分離純化目的蛋白。 使用說明： 1．使用1μg包裝的本產品時，請先取少量本質粒轉化大腸桿菌，進行質粒小量、中量或大量抽提后再用于后續用途。抽提獲得的質粒可以通過酶切電泳進行鑒定，或通過測序進行鑒定。 2．100μg包裝的本產品質粒濃度為0.1μg/μl，共1ml。可以直接用于酶切或者轉染細胞。 3．pET-N-GST-PreScission質粒在其多克隆位點適當酶切后可以插入待表達的目的基因，構建的質粒可以用常規方法轉入表達菌株。 |
使用方法：本產品僅用于科研
注意：標本采集人員需按有關規定做好個人防護。咽、鼻拭子最好在發病的3天采集。
在安全柜內將本產品分裝到自備的、螺旋蓋內有橡膠圈的5mL旋蓋塑料管里(一級容器)。
鼻拭子的采集：將棉簽輕輕插入鼻道內鼻腭處，停留片刻后緩慢轉動退出。以同一拭子拭兩側鼻孔。將棉簽浸入上步得到的、裝有3mL本產品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
咽拭子的采集：用棉簽擦拭雙側咽扁桃體及咽后壁，將棉簽浸入第一步得到的、裝有3mL本產品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
直接在一級容器上用油性記號筆寫明樣本的種類、采樣時間、編號、患者姓名。
將密閉后的標本放入大小適合的塑料袋內密封；每袋裝一份標本。同時也將標本有關信息填在標本送檢表上，連同一級容器封于塑料袋內。
將裝標本的密封袋放入自備的帶螺旋蓋內有橡膠圈的塑料容器(二級容器)內，擰緊蓋，在容器上標明有關信息。同一患者2份以上的密封標本，可以放在同一個二級容器內。二級容器要承受不少于95 KPa的壓力，內襯具吸水和緩沖能力的物質。所有容器必須印有生物危險標注。
將二級容器擺放在專用運輸箱內(或疫苗運輸箱)，放入冰排，然后以柔軟物質填充，并密封，由專人(2人)運送，不得郵寄，最好使用專車。
采集的標本若不能在24小時內送達，則應盡快在-70℃以下保存。無-70℃條件的，需在4℃冰箱短時間暫存，并盡快聯系遞送標本。流感病毒在-20℃～-40℃時不穩定，故長期保存最好在-70℃溫度以下進行。
注意事項：
①加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)。
蛋白（A）熒光共振能量轉移法（FRET）、（B）化學發光法（luminometry）、
（C）比色法（colorimetry）試劑專題
磷酸化酶活性定量試劑專題
ATP酶活性定量試劑專題
甲羥戊酸（MEVALONATE）通路分析試劑專題
L-半胱甲酯鹽酸鹽 L-Cysteine methyl ester 質量規格：>98%,BR RatP-SelectinELISAKit大鼠P選擇素(P-Selectin/CD62P)elisa規格：96T/48T
甘甲酯鹽酸鹽 Glycine methyl ester 質量規格：>98%,BR HIS標記蛋白Ni-A樹脂再生試劑盒20
L-谷二甲酯鹽酸鹽 L-Glutamic acid dimethyl ester 質量規格：0.98 MouseUlasensitivityi-iodothyronine,u-T3elisa小鼠高敏三甲狀腺原(u-T3)elisa規格：96T/48T
L-亮甲酯鹽酸鹽 L-Leucine methyl ester 質量規格：0.98 小鼠巨噬細胞炎性蛋白相關蛋白1(MRP1)elisa ，英文名： MRP1 ELISA Kit
L-苯丙甲酯鹽酸鹽 L-Phenylalanine methyl ester 質量規格：>99%,BR 人17羥皮質類(17-OHCS)ELISA檢測試劑盒Human17-Hydroxycoicosteroids,17-OHCSELISAKit 96T/48T
L-脯甲酯鹽酸鹽 L-Proline methyl ester 質量規格：>98.5%,BR 大鼠血管舒緩激肽(BK)試劑盒 Rat bradykinin,BK ELISA Kit
L-絲甲酯鹽酸鹽 L-Serine methyl ester 質量規格：>98%,BR 英文名稱RatPCNAELISAKit大鼠增殖細胞抗原(PCNA)規格：96T/48T
L-色甲酯鹽酸鹽 L-Tryptophan methyl ester 質量規格：>98%,BR 高通量遠紅外細胞篩選技術試劑盒5
L-酪甲酯 L-Tyrosine methyl ester 質量規格：>98%,BR ELISAKitEL人優球蛋白規格：48T/96T
L-半胱乙酯鹽酸鹽 L-Cysteine ethyl ester 質量規格：0.98 小鼠巨噬細胞炎性蛋白5(MIP-5)elisa ，英文名： MIP-5 ELISA Kit
pET-N-GST-PreScission質粒-d7 Flutamide-d7 質量規格：美國進口 英文名稱Ratai-thrombieceptorELISAKit大鼠抗受體(A)規格：96T/48T
4-過氧氫-d4 4-Hydroperoxy Cyclophosphamide-d4 質量規格：美國進口 英文名稱Ratai-thrombieceptorELISAKit大鼠抗受體(A)規格：96T/48T
乳酸鹽 Trimethoprim lactate salt 質量規格：美國進口 英文名稱RatALDELISAKit大鼠固同(ALD)規格：96T/48T
西維來司 Sivelestat 質量規格：美國進口 英文名稱RatALDELISAKit大鼠固同(ALD)規格：96T/48T
西維來司鈉鹽 Sivelestat salt 質量規格：美國進口 英文名稱RatAmylinELISAKit大鼠胰淀素(Amylin)elisa規格：96T/48T
2-羥 2-Hydroxy Nevirapine 質量規格：美國進口 英文名稱RatAmylinELISAKit大鼠胰淀素(Amylin)elisa規格：96T/48T
3-羥基 3-Hydroxy Nevirapine 質量規格：美國進口 英文名稱RatANCAELISAKit大鼠抗嗜中性粒細胞胞漿抗體(ANCA)規格：96T/48T
4-亞硝基磺胺甲惡唑 4-Nitroso Sulfamethoxazole 質量規格：美國進口 英文名稱RatenedioneELISAKit大鼠雄烯二同(ASD)規格：96T/48T
磺胺甲惡唑羥胺 Sulfamethoxazole Hydroxylamine 質量規格：美國進口 英文名稱RatenedioneELISAKit大鼠雄烯二同(ASD)規格：96T/48T
4-硝基磺胺甲惡唑 4-Nitro Sulfamethoxazole 質量規格：美國進口 英文名稱RatAngiogeninELISAKit大鼠血管生長素(Angiogenin)規格：96T/48T
